益生菌Lactobacillus casei Zhang免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用及機(jī)理研究.pdf

1、本課題以?xún)?nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從傳統(tǒng)發(fā)酵酸馬奶中分離鑒定的240株乳桿菌中，經(jīng)前期大量實(shí)驗(yàn)確立的一株具有明顯益生特性的乳桿菌Lactobacillus．caseiZhang(Lb．caseiZhang)為研究對(duì)象，觀察了其對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用，并探討了其可能的作用機(jī)理。 前期的大量研究表明：益生菌Lb．caseiZhang具有優(yōu)良的益生特性和降膽固醇、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等對(duì)機(jī)體有益的功能特性

2、。本課題探討了益生菌Lb．caseiZhang免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤方面的功能特性，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)分四部分： 第一部分：采用動(dòng)物活體試驗(yàn)方法，Lb．caseiZhang制備成熱致死菌體和活菌制劑各分成高、中、低三個(gè)劑量組灌服小鼠15天，測(cè)定胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；觀察ConA促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖作用、脾臟巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力。采用ELISA法檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-12、IL-1α、TNF-α的含量。

3、 第二部分：Lb．caseiZhang活菌制劑分高、中、低三個(gè)劑量組灌服小鼠。分別于第3、7、11、15天，摘取脾臟，計(jì)算脾指數(shù)：RT-PCR法測(cè)定脾臟中IL-2和IL-2RαmRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并從小鼠局部腸粘膜免疫組織及免疫細(xì)胞著手，對(duì)服用Lb.caseiZhang后小鼠腸道局部免疫組織-Peyer's結(jié)的數(shù)量計(jì)分進(jìn)行了研究。采用免疫組化法檢測(cè)小腸粘膜CD3+、IgA+細(xì)胞數(shù)量并通過(guò)圖象分析軟件分析其陽(yáng)性信號(hào)平均光密度值了解其表達(dá)情

4、況。 第三部分：以荷H22肝癌小鼠為模型，用Lb.caseiZhang活菌制劑分高、中、低三個(gè)劑量灌服小鼠12天后，滴片法測(cè)定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)；計(jì)算脾指數(shù)，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率，ELISA法測(cè)定血清中腫瘤壞死因子-β(TNF-β)的含量；免疫組化法檢測(cè)小鼠腫瘤細(xì)胞中癌基因Bcl-2和抑癌基因Bax蛋白的表達(dá)程度，從分子水平探討其抗腫瘤的可能機(jī)制。 第四部分：以荷H22肝癌化療小鼠為模型，觀察L

5、b．caseiZhang對(duì)化療藥物的減毒增效作用。以腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)聯(lián)甩Lb．caseiZhang活菌制劑高、中、低三個(gè)劑量灌服小鼠12天后，計(jì)算脾指數(shù)、腫瘤生長(zhǎng)抑制率，并對(duì)小鼠腸道局部免疫組織-Peyer's結(jié)進(jìn)行計(jì)數(shù)計(jì)分；采用原位雜交法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，采用碘化丙啶(PI)染色利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡率。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論是：具有明顯益生特性的乳桿菌Lb．caseiZhang對(duì)