竹節(jié)參多糖提取分離和免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：
　　 建立竹節(jié)參多糖(Panax japonicus polysaccharide，PJPS)含量的測(cè)定方法，獲得合理、穩(wěn)定、效率高的PJPS提取工藝，探討其在免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤方面的活性。
　　 方法：
　　 1、以無水葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，對(duì)蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法的測(cè)定條件和方法學(xué)進(jìn)行考察，并比較兩種方法測(cè)定竹節(jié)參多糖含量的結(jié)果。
　　 2、以PJPS提取率為考察指標(biāo)，以單因素實(shí)驗(yàn)為基

2、礎(chǔ)，采用正交試驗(yàn)確定最佳提取工藝，通過木瓜蛋白酶法、分步醇沉對(duì)PJPS進(jìn)行精制。
　　 3、通過小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型超敏反應(yīng)(Delayed-type hypersensitivity，DTH)實(shí)驗(yàn)、血清溶血值測(cè)定實(shí)驗(yàn)從非特異性免疫應(yīng)答、細(xì)胞性免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答三個(gè)方面研究PJPS對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)能力。
　　 4、采用MTT法檢測(cè)不同濃度PJPS分別在24 h、48 h及72 h對(duì)

3、人肺癌細(xì)胞HTB182、人腸癌細(xì)胞SW480、人腎癌細(xì)胞HEK293、人鼻咽癌細(xì)胞5-8F及人肝癌細(xì)胞HepG2增殖的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1、蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法均可用于測(cè)定竹節(jié)參中多糖含量，但蒽酮硫酸法的測(cè)定結(jié)果高于苯酚硫酸法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均優(yōu)于苯酚硫酸法。
　　 2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量，浸泡40 min，100℃，提取兩次，每次4h。木瓜蛋白酶法能較好地去除

4、PJPS中的蛋白質(zhì)，分步醇沉實(shí)驗(yàn)將PJPS分為PJPSⅠ和PJPSⅡ兩部分。
　　 3、PJPS能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，且與陽性對(duì)照香菇多糖組的作用相當(dāng)，對(duì)免疫低下小鼠的廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α具有明顯的提高作用，也能明顯改善免疫低下小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)及血清中IgM水平，且對(duì)免疫低下小鼠血清中IgM水平改善程度明顯優(yōu)于陽性對(duì)照香菇多糖。
　　 4、與陰性對(duì)照組相比，不同濃度PJPSS

5、在24 h、48 h、72 h對(duì)人肺癌細(xì)胞HTB182、人腸癌細(xì)胞SW480、人腎癌細(xì)胞HEK293、人鼻咽癌細(xì)胞5-8F及人肝癌細(xì)胞HepG2增殖無顯著性影響。
　　 結(jié)論
　　 1、蒽酮硫酸法更適于測(cè)定竹節(jié)參中多糖的含量，此方法簡(jiǎn)單快速，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果可靠。
　　 2、PJPS的最佳提取工藝為:40倍溶劑用量，浸泡40 min，100℃，提取兩次，每次4h。
　　 3、PJPS能從非特異性免疫應(yīng)答