槲皮素抑制人胃癌BGC-823細胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的研究.pdf

1、目的：將槲皮素（Quercetin,QUT）作用于人胃癌細胞株 BGC-823，設(shè)置不同的作用濃度和作用時間，觀察細胞形態(tài)、增殖能力、細胞周期、凋亡作用、關(guān)鍵基因表達等指標的變化，研究槲皮素對胃癌細胞增殖、凋亡的作用，探討其作用機制，為槲皮素用于臨床防治胃癌提供可靠的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：將不同濃度的槲皮素與 BGC-823細胞體外共培養(yǎng)不同時間后：①倒置顯微鏡、細胞爬片HE染色分別觀察細胞形態(tài)學變化；②四甲基噻唑氮藍（

2、Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法檢測細胞生長抑制率；③流式細胞儀（flow cytometer, FCM）檢測細胞周期、凋亡率；④透射電鏡(electronic microscopy, EM)觀察細胞超微結(jié)構(gòu)變化及凋亡形態(tài)變化；⑤Western blot法檢測Caspase-3蛋白以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax表達；⑥免疫組化染色法檢測Caspase-3、bcl-2、Bax等蛋白的表達。

3、　　結(jié)果：①倒置顯微鏡下，對照組細胞貼壁生長，呈單層鵝卵石樣緊密排列，形態(tài)不規(guī)則，有較長的偽足，可融合成集落，細胞分裂增殖旺盛，有多量瘤巨細胞；實驗組經(jīng)槲皮素處理后，細胞偽足回縮，細胞變小、變圓，細胞排列雜亂，或松散或聚集成團，出現(xiàn)懸浮現(xiàn)象，瘤巨細胞減少或不見瘤巨細胞，且存在時間和劑量依賴性。②細胞爬片HE染色，可見正常細胞為多邊形，偽足較長，并有多量瘤巨細胞。經(jīng)槲皮素處理后，細胞偽足回縮，細胞變小、變圓，瘤巨細胞減少或不見瘤巨細胞，存

4、在劑量依賴性。③MTT法結(jié)果顯示，槲皮素對胃癌BGC-823細胞有明顯的增殖抑制作用，與對照組有顯著性差異(P<0.05)，隨著作用時間的延長、作用劑量的增大，抑制作用越明顯。④FCM檢測可見槲皮素影響B(tài)GC-823細胞的細胞周期分布，使S期比例增高，G0/G1期比例降低，具有劑量和時間依賴性，各組之間差異具有顯著性(P<0.05),FCM檢測在G0/G1期前出現(xiàn)亞二倍體峰，即凋亡峰，該峰面積與槲皮素作用呈劑量和時間依賴性。同時，F(xiàn)CM

5、檢測顯示隨著槲皮素作用濃度的增大和作用時間的延長，細胞凋亡率逐漸增加，各組之間差異具有顯著性（P<0.05）。⑤透射電鏡下正常BGC-823細胞體積較大，結(jié)構(gòu)完整，核仁、核膜清晰，染色質(zhì)分布均勻；60μmol/L、90μmol/L槲皮素作用24h后， BGC-823細胞出現(xiàn)凋亡特征，可見細胞皺縮、核質(zhì)比例減小，核仁不清晰，核染色質(zhì)集中在核膜下，有的細胞形成新月體樣結(jié)構(gòu)，并可見凋亡小體。⑥Western blot法檢測結(jié)果顯示：Caspa

6、se-3蛋白在不同濃度槲皮素作用下其17KD活性片段的比值分別為16.87％、26.14%、33.01%、67.36%、83.52%、99.22%，隨著槲皮素濃度的增加，Caspase-3蛋白被大量活化，增強其表達，Bax陽性表達逐漸增強,bcl-2陽性表達逐漸減弱。⑦免疫組化染色法顯示，隨著槲皮素濃度的增大， BGC-823細胞的Caspase-3、Bax陽性表達逐漸增強，bcl-2陽性表達率逐漸降低，各組之間差異均具有顯著性(P<0

7、.05)。
　　結(jié)論：
　　1.槲皮素可導(dǎo)致胃癌細胞BGC-823形態(tài)發(fā)生改變。
　　2.槲皮素抑制胃癌細胞 BGC-823的生長和增殖，通過改變胃癌細胞 BGC-823的細胞周期分布，使細胞阻滯在 S期，從而抑制胃癌細胞 BGC-823的生長和增殖，且存在劑量和時間依賴性。
　　3.槲皮素可誘導(dǎo)胃癌 BGC-823細胞凋亡，通過降低 bcl-2/Bax比值，上調(diào)Caspase-3蛋白的表達來實現(xiàn)的，也存在著劑量