裸鼠人肝癌原位移植耐藥模型的建立.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)肝癌細胞系HepG2及瘤細胞裸小鼠皮下注射形成荷瘤鼠，建立瘤組織裸小鼠肝包膜下原位移植模型，通過腹腔內(nèi)間歇注射用藥在體內(nèi)誘導建立穩(wěn)定表達多藥耐藥基因(MDR1)人肝癌裸小鼠原位移植多藥耐藥模型，并對其耐藥機制進行初步探討。 方法：體外培養(yǎng)肝癌細胞系HepG2，建立裸鼠的皮下腫瘤，形成供瘤鼠。取裸小鼠(4～6周齡)16只，1％戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔內(nèi)麻醉下在裸小鼠肝包膜下移植1mm<'3>大小腫瘤微塊建

2、立原位肝癌模型。鹽酸阿霉素1.5mg/kg 體重腹腔內(nèi)注射，1次/周，共8周，誘導建立裸鼠原位肝癌耐藥模型。耐藥細胞原代培養(yǎng)3-4代后應用四唑藍(MTT)快速比色法檢測耐藥細胞的多藥耐藥性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(reVersetranscription polymerase chain reaction，RT-PCR)和流式細胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測腫瘤耐藥基因mdr-mRNA和P-糖蛋白(P-glycoprote

3、in，P-gp)的表達。 結(jié)果：移植瘤組織形態(tài)及生物學方面符合人肝癌特征，MTT法檢測示誘導組HepG2對ADM的耐藥指數(shù)增加了15.6倍。FCM觀察發(fā)現(xiàn)P-gp蛋白的表達陽性率由30.2+0.01％增加至75.4+2.78％。RT-PCR顯示誘導組mdr1-mRNA高表達。 結(jié)論：成功地建立了與臨床肝癌相似的穩(wěn)定表達MDR1基因的裸鼠原位肝癌耐藥模型，該耐藥細胞株P(guān)-gp高表達。為進一步研究肝癌多藥耐藥的產(chǎn)生機制和逆轉(zhuǎn)