齊墩果酸對白血病細胞中VEGF表達的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：本研究的目的在于通過檢測人白血病細胞株HL-60、K562在常氧及缺氧條件下并在齊墩果酸的影響下，缺氧誘導因子1 α(HIF-1 α)、血管內皮細胞生長因子(VEGF)、誘導型-氧化氮合酶(iNOS)蛋白及mRNA表達的變化情況，進一步探討它們之間相互關系。為抗白血病血管新生這一新的治療靶點提供重要的研究依據(jù)。 方法：建立HL-60、K562細胞體外低氧培養(yǎng)模型。MTT法檢測不同濃度齊墩果酸對K562細胞的生存影響。采用R

2、T-PCR和Western blot分別檢測齊墩果酸對常氧及缺氧48小時后白血病HL-60、K562細胞HIF-1 α、VEGF和iNOS的mRNA及蛋白的表達變化。ELISA技術檢測齊墩果酸對常氧及缺氧白血病HL-60、K562細胞培養(yǎng)液中VEGF含量的影響。 結果： 1．藥物對細胞抑制增殖的作用：采用MTT比色法檢驗結果顯示：同一時間點不同濃度的OA(40、60、80、100gmol/1)對K562細胞的抑制作用，與

3、空白對照組比較，具有統(tǒng)汁學意義(P<0.05)：100μmol/l與80μmol/l的約物刈K562細胞生長抑制作用無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。同一濃度在不同時間點(12、24、48、72h)K562細胞的抑制作用與對照組比較，均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。GA作用K562細胞72h與48h的抑制率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。OA對K562細胞表現(xiàn)增殖抑制效應呈時間、劑量依賴性，其作用的最適濃度為80μmol/l，最適時間為48h

4、。 2．半定量RT-PCR法結果顯示：HIF-1 α、VEGF、iNOS的mRNA在各組都有不同程度的表達，缺氧組與常氧組比較表達明顯增強(P<0.05)，OA處理組與對照組比較表達明顯受抑制(P<0.05)齊墩果酸可明顯抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS mRNA表達。應用Spearman等級相關法分析HIF-1 α分別和VEGF、iNOSmRNA表達的相關性，結果顯示：在HL-60細胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(

5、Rs=0.87580，P=0.0044)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.96826，P=0.0001)；在K562細胞中HIF-1 α和VEGFmRNA(Rs=0.83652，P=0.00963)、HIF-1 α和iNOSmRNA(Rs=0.89123,P=0.0030)可見HIF-1α和VEGF、iNOS基因在轉錄水平上具有相關性。 3. westem blot法結果顯示：HIF-1α、VEGF、iNOS的蛋白在

6、各組都有不同程度的表達，缺氧組與常氧組比較表達明顯增強(P<0.05)，OA處理組與對照組比較表達明顯受抑制(P<0.05)齊墩果酸可明顯抑制HIF-1 α、VEGF、iNOS蛋白表達。在HL-60細胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1α和VEGF、iNOS和VEGF蛋白表達之間均呈正相關，相關系數(shù)分別為0.98488、0.82713、0.89478(P<0.01)在K562細胞中iNOS和HIF-1 α、HIF-1 α和VEGF、

7、iNOS和VEGF蛋白表達之間均呈正相關，相關系數(shù)分別為0.98354、0.96190、0.96775 (P<0.01)。 結論：常氧條件下，HL-60、K562細胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白低表達。低氧條件下，HL-60、K562細胞株中HIF-1 α及VEGF、iNOS mRNA和蛋白表達均顯著增加，與常氧組比較差異有顯著性。在HL-60、K562細胞株中，HIF-1 α、iNOS、VEGF蛋白的