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文檔簡介
1、目的:基于細胞內TGF-β/Smads信號傳導通路探討盆炎灌腸方治療盆腔炎性疾病后遺癥慢性盆腔痛止痛機理,為盆炎灌腸方的臨床廣泛應用提供科學的理論依據。
方法:選用離體培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞,傳代培養(yǎng),以中藥盆炎灌腸方對細胞作用的最大無毒濃度6.25mg/ml作用于人增生性瘢痕成纖維細胞,以加TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體+盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方組作為實驗組,加入細胞培養(yǎng)基組為對照組,應用雙抗體夾心ABC-ELI
2、SA法檢測四組細胞培養(yǎng)上清液中Smad3和Smad7蛋白的含量變化,應用RT-PCR法檢測四組細胞中TGF-β1、Smad3、Smad7和Ⅰ型膠原mRNA的表達情況。
結果:1、與對照組相比,實驗組三組中Smad3的含量均明顯降低,Smad3在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的含量依次為796.60±180.32pg/ml、1659.92±303.12 pg/ml、2090.88±120.67
3、pg/ml,與對照組含量2569.82±111.89 pg/ml比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),實驗組各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而實驗組三組中Smad7的含量與對照組比較均明顯升高,Smad7在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的含量依次為68.91±12.62pg/ml、30.62±6.35pg/ml、14.39±1.99pg/ml,與對照組含量0.97±1.09pg/ml相
4、比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),實驗組各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2、實驗組三組中的TGF-β1、Smad3和Ⅰ型膠原mRNA的表達與對照組相比均降低,其中TGF-β1mRNA在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的灰度與內參灰度比值依次為0.44±0.03、0.91±0.23、1.46±0.26,與對照組2.19±0.04相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),實驗組各組間比較差
5、異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Smad3mRNA在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的灰度與內參灰度比值依次為0.54±0.10、1.39±0.10、1.76±0.05,與對照組2.07±0.14相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),實驗組各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Ⅰ型膠原mRNA在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的灰度與內參灰度比值依次為0.21
6、±0.02、0.79±0.06、0.87±0.02,與對照組1.02±0.06相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),實驗組各組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而實驗組三組中Smad7mRNA與對照組相比均升高,Smad7mRNA在盆炎灌腸方組、盆炎灌腸方+TGF-β1抗體組、TGF-β1抗體組的灰度與內參灰度比值依次為1.23±0.06、1.00±0.15、0.76±0.06,與對照組0.57±0.05比較,差異均有統(tǒng)計學
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