近視動物模型中鞏膜COL1α2啟動子區(qū)甲基化的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   1.明確實驗性近視動物模型C57BL/6小鼠鞏膜COL1α2基因mRNA水平的變化;
   2.研究形覺剝奪性近視模型C57BL/6小鼠鞏膜COL1α2啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的改變。
   方法:
   1.建立形覺剝奪性近視模型C57BL/6小鼠:C57BL/6小鼠72只23日齡,隨機分為3組,單眼剝奪組:4周(n=48),形覺剝奪恢復組:(n=24)對側眼作自身對照;正常組(n=3

2、6)。實驗前后用紅外偏心驗光儀測量小鼠眼球的屈光度,實驗結束后提取處理組的實驗眼、處理組的對側眼和正常對照組的對照眼的鞏膜組織,每兩只鞏膜按照同一處理組內(nèi)隨機合并,提取基因組RNA和DNA,用以后續(xù)實驗。
   2.形覺剝奪性C57BL/6小鼠的近視形成期鞏膜COL1α2 mRNA水平上的變化:36只C57BL/6小鼠隨機分成3組:形覺剝奪組:單眼遮蓋4周(n=24);形覺剝奪恢復組單眼遮蓋4周恢復7天(n=24),年齡相匹配的

3、正常對照組(n=24)。每組在實驗結束后分別提取鞏膜組織,處理組的實驗眼、處理組的對側眼和正常對照組的對照眼,按同一處理組內(nèi)隨機數(shù)字表每兩只鞏膜合并提取基因組RNA,real timePCR檢測不同處理眼鞏膜組織COL1α2 mRNA水平變化狀況。
   3.形覺剝奪性C57BL/6小鼠的近視形成期鞏膜COL1α2啟動子區(qū)域CpG島甲基化水平的改變:36只C57BL/6小鼠隨機分成2組:形覺剝奪組:單眼遮蓋4周(n=24);年齡

4、相匹配的正常對照組(n=12)。每組在實驗結束后分別提取鞏膜組織,處理組的實驗眼、處理組的對側眼和正常對照組的對照眼,按同一處理組內(nèi)隨機數(shù)字表每兩只鞏膜合并提取基因組DNA,經(jīng)過亞硫酸鹽處理后用通過克隆測序的方法檢測不同處理眼鞏膜組織COL1α2啟動子區(qū)域和第一外顯子區(qū)域CpG島甲基化狀況。
   統(tǒng)計方法是用SPSS11.5軟件統(tǒng)計,同一個小鼠屬組內(nèi)處理組的實驗眼和處理組的對側眼比較,采用配對t檢驗,不同小鼠屬組間比較采用獨立

5、樣本t檢驗。
   結果:
   1.形覺剝奪4周后,同一小鼠的實驗眼相比其對側眼向近視方向漂移P<0.05。
   2.形覺剝奪4周,形覺剝奪眼和正常對照眼相比COL1α2 mRNA下降33.8%P=0.024(P<0.05),剝奪眼和對側眼之間COL1α2 mRNA水平并沒有明顯的統(tǒng)計學差異,但有下降趨勢。去除眼罩7天,實驗性近視完全恢復。
   3.形覺剝奪4周,形覺剝奪眼和正常對照眼COL1α2啟

6、動子區(qū)域CpG島甲基化水平不存在明顯差異,剝奪眼和對側眼之間甲基化水平并沒有明顯的統(tǒng)計學差異;形覺剝奪眼,對側眼和對照眼甲基化水平較剝奪4周未見明顯變化。
   結論:
   1.小鼠單眼形覺剝奪4周可誘導出相對近視;利用相干光斷層掃描儀測量小鼠眼球生物學參數(shù)可以較好反映屈光度的改變;
   2.C57BL/6小鼠近視模型鞏膜形覺剝奪眼和正常對照眼相比COL1α2 mRNA下降。形覺剝奪恢復組,實驗眼和正常對照眼

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