腎母細胞瘤RASSFIA基因啟動子區(qū)甲基化研究.pdf

1、中文摘要前言RASSFIA基因是近年發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因(GeneTSG)o脅究表明，RASSFIA蛋白參與RasTumorSuppressor途徑信號傳導、DNA損傷修復和誘導凋亡，從而被確定為腫瘤抑制基因。其啟動子區(qū)高甲基化導致基因滅活，與許多腫瘤，如肺癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細胞瘤、腎癌和前列腺癌等發(fā)生有關(guān)。由于啟動子區(qū)高甲基化，基因轉(zhuǎn)錄受到抑制抑癌作用不能發(fā)揮，導致腫瘤發(fā)生，相應蛋白減少或缺失，致使其。這是廣大學者公認的觀

2、點，甲基化也成為近期研究的熱點擴Yo于目前國內(nèi)外尚未見到腎母細胞瘤RASSFIA基因啟動子區(qū)甲基化報道，我們采用定點檢測基因甲基化方法，檢測9例腎母細胞瘤，結(jié)果報道如下。方法收集2001年我院手術(shù)切除腎母細胞瘤及相應瘤旁殘留腎組織9例，70℃冰箱中保存?zhèn)溆?。用酚氯仿法提取DNA。紫外分光光度儀檢測DNA濃度，選用OD2600D280值大于1.75的樣品。采取強堿變性、亞硫酸氫鈉對苯二酚法處理DNA后，用層析柱過柱除鹽。巢式PCR擴增RA

3、SSFIA基因啟動子區(qū)DNA片段。應用一對半引物，引物序列如下:ML730:5ACCCTCTCCTCTAACACAATAAAACTAACC3ML561:5CCCCACAATCCCTACACCCAAAT3MU379:5G1111GGTAGTTTAATGAGTITAGG11“11113o第一次用引物MU379ML730PCR擴增經(jīng)亞硫酸氫鈉處理基因不能轉(zhuǎn)錄，無蛋白生成，不能抑制腫瘤進展。因而有必要研究RASSFIA基因甲基化情況。RASSF

4、IA基因是一個抑癌基因。長期以來，人們發(fā)現(xiàn)，肺癌、鼻咽癌組織及相應腫瘤細胞系等多種腫瘤，都在3P區(qū)域有高頻率雜合性缺失、基因片段敲除等異常，并推測在3滬一3尸.4區(qū)間可能存在抑癌基因。在3廣’區(qū)定位克隆了包括RASSFIA在內(nèi)的19個腫瘤抑制基因候選基因，確定在3尹’的一個Ras效應基因家族RASSF1，其有3個轉(zhuǎn)錄版本一ABC.RASSFIA基因cDNA全長1873bp，編碼340個氨基酸的蛋白質(zhì)。推測其功能:1.參與細胞信號傳導，激

5、活Ra。途徑。2.與DNA損傷修復蛋白一XPA相互作用，參與DNA損傷修復。3，作為細胞生長負向調(diào)控子。4.介導凋亡。Ras基因是一個原癌基因，但其效應蛋白家族RASSFI，卻有抑癌功能。這是因為，Ras途徑被激活，促進細胞生長和轉(zhuǎn)型的同時，Ras蛋白也作用于Ras效應蛋白來誘導生長抑制。并提出了一個假說:驅(qū)動細胞死亡及增殖的信號傳導路緊密伴隨著保護并抑制原癌基因的傳導路。這個假說打破了原癌基因、癌基因和抑癌基因的絕對界限。理解Ras基

6、因是如何打破腫瘤的細胞死亡平衡的，對于明確人類腫瘤發(fā)生中Ras作用是重要的。目前對RASSFIA啟動子區(qū)甲基化檢測發(fā)現(xiàn)，2例小細胞肺癌全部甲基化19例鱗狀細胞肺癌中7例全部甲基化，余無甲基化另外，在32個癌細胞系中，甲基化程度較高而正常組織無甲基化。還有學者研究了腎癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、神經(jīng)母細胞瘤、嗜鉻細胞瘤、胃癌、前列腺癌等腫瘤，RASSFIA啟動子區(qū)均存在高頻率甲基化現(xiàn)象，而且在前列腺癌中甲基化程度越高，臨床預后越差。