獼猴溶組織內阿米巴原蟲病病原分離鑒定及凝集素hgl基因的原核表達.pdf

1、本研究從獼猴阿米巴病例的腹瀉糞樣中分離到一株阿米巴原蟲，該原蟲經(jīng)過實驗室的培養(yǎng)和形態(tài)學觀察后，初步鑒定為溶組織內阿米巴或迪斯帕內阿米巴，采用鑒別溶組織內阿米巴和迪斯帕內阿米巴的蟲種特異性引物，對阿米巴原蟲peroxiredoxin基因進行PCR擴增，結果顯示溶組織內阿米巴特異性引物擴增出了相應大小的DNA片斷，經(jīng)過克隆后測序，序列分析(登錄號為：EU022309)顯示本蟲株與人溶組織內阿米巴株序列同源性為98％-99％，而與人迪斯帕內阿

2、米巴株序列同源性僅為89％，鑒定該阿米巴獼猴分離株為溶組織內阿米巴，命名為EntamoebahistolyticaMH530株。 參照GenBank中收錄的人溶組織內阿米巴原蟲半乳糖/乙酰氨基半乳糖凝集素的重鏈hg1基因序列設計一對引物，通過PCR擴增獲得與預期相符的產(chǎn)物，經(jīng)過克隆后測序，得到1761bp的有效基因序列。通過對該基因核苷酸序列和推導的氨基酸進行分析，結果表明核苷酸序列與人溶組織內阿米巴的序列同源性在93.44％-

3、96.21％之間，與人迪斯帕內阿米巴的序列同源性為87.44％。該基因編碼了一個有587個AA的多肽，分子量為65.514KD，等電點理論值為5.17，具有較強的親水性，蛋白抗原性分析顯示其抗原位點分布于整個蛋白質多肽鏈。該序列已登錄在GenBank上(登錄號為EU244479)。 根據(jù)獲得的基因序列設計一對表達引物，對其中重要的含多個抗原決定簇的LC3段進行原核表達，制備目的基因和表達載體，將目的片斷插入pET32b(+)表達