雷帕霉素抑制人骨肉瘤MG-63細胞周期及CyclinD1表達的實驗研究.pdf_第1頁
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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文雷帕霉素抑制人骨肉瘤MG63細胞周期及CyclinD1表達的實驗研究姓名：高翔申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（骨科）指導(dǎo)教師：楊述華201004AbstractObjective：ToinvestigatetheinhibitiveeffectsofcellcycleCyclinD1expressionbyrapamycininMG63cellsprobethepossiblemechanism.Method：M

2、G63cellswereculturedinvitrotreatedwithdifferentconcentrationofrapamycin(1nmolL、10nmolL、25nmolL).UsedCCK8bywatersolubletetrazoliumsalt(WST8)assaytodetectthegrowthinhibitiveeffectsinMG63cellstreatedwithrapamycin；Flowcytome

3、trywasusedtoanalysisMG63cellcycle；ThegeneexpressionofCyclinD1wasexaminedbyRTPCRimmunocytochemistrySABC.Result：CCK8assayshowedthatthegrowthofMG63cellswassignificantlyinhibitedbyrapamycinitrevealedatimedependentrelationshi

4、p(P＜0.05).Thelongertherapamycintreatedthehigherthecellproliferationinhibitionrateperfmed.Buttherewasnosignificantlydifferentbetweenthreerapamycingroups(P＞0.05)；FlowcytometricanalysisrevealedasignificantlyG0G1phasearresti

5、nMG63cellstreatedwithrapamycin(P＜0.05).TheG0G1phasecellsweresignificantlyincreasedinthreerapamycingroupscomparedwiththecontrolgrouptheSphasecellsweresignificantlydecreased；RTPCRtestshowedtherewasnosignificantchangebetwee

6、ndifferentrapamycingroupscontrolgroupintheexpressionofCyclinD1mRNA(P＞0.05).CyclinD1mRNAexpressionwasnotsignificantlyaffectedbyrapamycininMG63cellsImmunocytochemistryanalysisshowedasignificantdownregulationofCyclinD1prote

7、ininrapamycingroupsitrevealedaconcentrationdependentrelationship(P＜0.05).Conclusion：RapamycincaninhibitthegrowthcellcycleofMG63cellsdownregulatetheexpressionofCyclinD1proteinbutithadnosignificanteffectintheexpressionofCy

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