二十二碳六烯酸對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骨肉瘤是一種高度惡性的原發(fā)骨腫瘤，主要發(fā)生于兒童與青少年，常見發(fā)生部位在股骨遠(yuǎn)端與脛骨近端，目前標(biāo)準(zhǔn)的治療方案是新輔助化療結(jié)合手術(shù)治療，盡管新輔助化療的應(yīng)用提高了5年生存率，但是復(fù)發(fā)病例及有肺部微轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后不良。而且近30年來(lái)在抗骨肉瘤方面沒(méi)有獲得實(shí)質(zhì)性的進(jìn)展，傳統(tǒng)化療藥物嚴(yán)重的毒副作用與其多藥耐藥（multidrug resistance MDR），使一部分患者獲益很少。所以，療效更好，毒副作用更小的抗骨肉瘤新藥急需開發(fā)。

2、　　二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid, DHA)，又稱“腦黃金”,屬于ω-3系列長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA），在人體中必需但體內(nèi)又不能合成,但在深海魚類和海洋微藻類植物中含量豐富。二十二碳六烯酸具有多種生物活性，例如：抗炎，免疫調(diào)節(jié)，預(yù)防動(dòng)脈硬化等作用，而近些年的研究側(cè)重于其在抗腫瘤方面的作用。有研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)DHA對(duì)子宮癌，乳腺癌，結(jié)腸癌和前列腺癌等有抑制作用[1-3]。而DHA對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株的作用以

3、及相關(guān)機(jī)制未見報(bào)道，本研究以人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63為研究對(duì)象，探討DHA對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株增殖的影響。
　　目的：研究DHA對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63增殖的影響及可能的分子機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人骨肉瘤細(xì)胞MG-63，用MTT法檢測(cè)不同濃度DHA（20 ug/ml，40 ug/ml，60 ug/ml DHA試驗(yàn)組，對(duì)照組，溶媒對(duì)照組）分別處理細(xì)胞24h，48h，72h后，統(tǒng)計(jì)DHA對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用。并用倒置

4、顯微鏡觀察不同DHA濃度對(duì)MG-63細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。采用流式細(xì)胞儀分析不同濃度DHA處理下的各期細(xì)胞比率和細(xì)胞凋亡率。用 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同濃度藥物處理 MG-63細(xì)胞48h后，其細(xì)胞內(nèi)BCL-2和Caspase-3 mRNA含量的變化。用Western Blot法檢測(cè)不同濃度藥物處理MG-63細(xì)胞48h后，其細(xì)胞內(nèi)BCL-2，Caspase-3蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.形態(tài)學(xué)結(jié)果：倒置顯微鏡下未處理組可見

5、細(xì)胞呈紡錘形，多邊形，體積大，結(jié)構(gòu)清晰，胞質(zhì)透亮，貼壁牢固。藥物處理組可見細(xì)胞突起消失，有的呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞逐漸變圓，變小，有的細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)基中。
　　2.MTT結(jié)果：DHA能明顯抑制MG-63細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈時(shí)間和濃度依賴性，與對(duì)照組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.碘化丙啶染色法流式檢測(cè)結(jié)果：隨著DHA藥物濃度的提高，MG-63細(xì)胞凋亡率也提高，呈明顯濃度依賴性，0ug/ml，20 ug/ml，40

6、 ug/ml，60 ug/ml的DHA處理48h后，其凋亡率分別為(2.41±3.72)％，(7.34±4.44)%，(16.93±5.32)%，(27.37±5.53)%。40 ug/ml和60 ug/ml濃度組與對(duì)照組相比，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果：DHA能改變MG-63細(xì)胞的周期分布，隨濃度的提高，S期細(xì)胞比例降低， G1期細(xì)胞比例提高。
　　4.RT-PCR結(jié)果：DHA處理MG-63細(xì)胞后可