缺氧-無血清培養(yǎng)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶-硫化氫合成途徑的影響.pdf

1、目的:檢測大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在不同缺氧/無血清培養(yǎng)時間后的細胞凋亡與對3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶/硫化氫合成體系的影響,同時運用外源性硫化氫預(yù)處理以檢測其對缺氧/無血清誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡的影響。
　　方法:取第3代大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,設(shè)立5個(0h、3h、6h、12h和24h)不同的缺氧/無血清培養(yǎng)時間點。用流式細胞儀SubG1法檢測各組大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的凋亡率,CCK-8法檢測各組細胞活力,同時檢測各組細胞及培

2、養(yǎng)基中硫化氫的含量以及細胞中硫化氫合成酶3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶的表達變化情況,最后用兩個不同濃度(100 and200μM)的外源性硫化氫預(yù)處理骨髓間充干細胞30分鐘后再進行上述不同時間缺氧/無血清誘導(dǎo)凋亡,檢測其對細胞凋亡率的影響。
　　結(jié)果:與正常培養(yǎng)組相比,缺氧/無血清培養(yǎng)后,細胞的凋亡率顯著增高,細胞活力明顯下降。缺氧/無血清培養(yǎng)時間越長,細胞凋亡率越高,細胞活力越低,并且細胞及培養(yǎng)基中硫化氫含量及細胞中硫化氫合成酶3-

3、巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶的表達也越低,差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。而一定濃度外源性硫化氫預(yù)處理后的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)缺氧/無血清培養(yǎng)誘導(dǎo)的細胞凋亡率明顯下降,且在200μmol/L時的保護效果最好。
　　結(jié)論:缺氧/無血清培養(yǎng)可以誘導(dǎo)大鼠MSCs的凋亡,且隨著缺氧/無血清培養(yǎng)時間的延長,細胞活力越低,細胞凋亡率越高。正常的大鼠MSCs中存在一定含量的內(nèi)源性H2S,其含量約為10~16μmol/g·protein。缺氧/無血清培養(yǎng)可以使