慶大霉素鼓室內注射后在腦干前庭與聽覺中樞的分布和損傷的研究.pdf

1、目的：1)探索慶大霉素鼓室內注射后在腦干前庭中樞是否有分布及其分布特點；2)探索鼓室內注射慶大霉素后在腦干聽覺中樞是否有分布及其分布特點；3)鼓室內注射慶大霉素后對于腦干前庭及聽覺核團的影響
　　方法：1)本實驗選用正常成年白化豚鼠作為研究對象,經鼓室注射30mg/ml慶大霉素作為動物模型;經卵圓窗注射HRP逆行示蹤劑并結合既往文獻,定位豚鼠前庭傳出神經元；2)造模成功后,在不同時間點處死;行免疫組織化學、免疫熒光染色組,用多聚甲

2、醛進行心臟灌注固定、取材,行冰凍切片,獲得連續(xù)腦片;行透射電鏡組,處死后用多聚甲醛和戊二醛混合液進行心臟灌注固定、取材,繼而行振動切片；3)通過甲苯胺藍染色標記腦干不同核團的相對位置,通過DAB染色,識別豚鼠前庭傳出神經元;通過免疫組織化學單標、三標技術(anti-gentamicin標記慶大霉素,anti-betaⅢtubulin標記神經元,DAPI標記細胞核),了解慶大霉素的分布情況；4)熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡、透射電鏡下

3、觀察并拍照,AdobephotoshopCS2處理圖片,慶大霉素陽性細胞計數,并用SPSS16.0進行統(tǒng)計分析。
　　結果：1)鼓室內注射后,慶大霉素在前庭傳出神經元、上橄欖核、耳蝸核均有染色,在前庭神經節(jié)及前庭復合核無慶大霉素分布。在前庭傳出神經元和上橄欖核,慶大霉素在給藥側及給藥對側均有染色,主要分布于神經元胞漿及其突起,神經核內未見慶大霉素染色。在耳蝸核,僅給藥側出現明顯慶大霉素陽性標記,對側耳蝸核未及慶大霉素染色;主要分布

4、于神經元胞體以外,神經元胞體內未見任何陽性標記;背側耳蝸核較腹側耳蝸核分布強。2)慶大霉素給藥后24小時,前庭傳出神經元即有慶大霉素染色。至3天達到高峰,7天時仍保持等同水平,至14天時慶大霉素陽性細胞數明顯減少,至30天時進一步減少。3)背側耳蝸核內耳蝸神經纖維、進入腦干的前庭神經纖維以及上橄欖核下行傳出神經通路全程均可及慶大霉素標記陽性。4)鼓室內注射慶大霉素3天后,前庭Ⅰ型、Ⅱ型毛細胞的傳入及傳出突觸均可見顯著的空泡樣變性;支配Ⅱ

5、型毛細胞的傳入及傳出突觸發(fā)生空泡樣變性后,無法區(qū)分。5)給藥后3天,前庭傳出神經核內的有髓神經纖維髓鞘板層松解,原漿型星形膠質細胞嚴重水腫;神經元突起出現顯著的空泡樣變性,內容物溶解。給藥后30天,有髓神經髓鞘板層排列緊湊整齊;神經元胞質及核明顯腫脹,電子密度降低,核內染色質缺失,胞漿內線粒體可見少許小泡。給藥后3天,耳蝸核內可見有髓神經纖維髓鞘板層廣泛松解,而神經元胞漿、樹突、細胞核未見明顯異常;給藥后30天,有髓神經纖維髓鞘板層排列

6、緊湊整齊,另外可見神經元外包繞的星形膠質細胞突起明顯水腫。給藥后3天,上橄欖核內有髓神經纖維髓鞘板層松解,樹突內空泡樣變性、胞漿內出現較多初級溶酶體;給藥后30天,有髓神經髓鞘板層排列緊湊整齊,星形膠質細胞胞質、突起及核明顯腫脹,核團內可見暗細胞。
　　結論：1)鼓室內注射慶大霉素后,不僅分布于耳蝸、前庭外周器官,相應的中樞核團也有分布,且保留慶大霉素一段時間;逆行性軸突運輸是慶大霉素進入前庭傳出神經元、上橄欖核的可能方式。順行性

7、軸突運輸是慶大霉素進入耳蝸核的可能方式。2)前庭復合核無慶大霉素分布,可能原因包括:前庭神經節(jié)基本無慶大霉素分布,以及跨突觸轉運慶大霉素較不容易。3)慶大霉素對分布陽性的核團造成直接損傷,對傳出神經核團的損傷較傳入核團嚴重。給藥后3天,傳出神經核團神經纖維髓鞘板層松解、神經元突起空泡樣變性、原漿型星形膠質細胞水腫;至30天,髓鞘病變可逆性恢復,但個別神經元發(fā)生嚴重腫脹,甚至凋亡;給藥后,耳蝸核出現顯著的神經纖維髓鞘變性,但神經元未見明顯