稻瘟病菌絲氨酸蛋白酶在水稻中的功能驗證.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)是水稻重要病害稻瘟病的病原茵，也是研究絲狀真菌生物學的重要模式生物。植物與病原菌相互作用的過程中，涉及雙方許多信號分子的識別與傳導。在病原菌方面，這些信號分子往往就是與植物受體蛋白起作用的激發(fā)子或其它致病因子。分泌蛋白因其分泌到體外的特性，最有可能是病原菌分泌到細胞外與寄主受體蛋白起作用的激發(fā)子和致病因子。很多研究表明稻瘟病菌絲氨酸蛋白酶很可能是一種潛在的致病因子。 在先前的研究中

2、我們認為表達強度較大的稻瘟病菌絲氨酸蛋白酶基因MGG_07965.5很可能具有比較重要的生物學功能。進一步的生物信息學分析表明：它是一種分泌蛋白，含有一個具有20個氨基酸殘基的信號肽序列。 本研究反轉錄測序發(fā)現(xiàn)在稻瘟病菌數(shù)據(jù)庫中的絲氨酸蛋白酶基因MGG_07965.5注釋為內含子的部分，實際上可能是外顯子部分。為了進一步了解絲氨酸蛋白酶對水稻的影響，研究構建了分別含有全長MGG_07965.5和剪切信號肽的MGG_07965.5

3、基因的瞬時表達載體pUPTN-F-07965.5、pUPTN-C-07965.5和過量表達載體pCAMBIA1301-ubi-F-07965、pCAMBIA1301-ubi-C-07965。 通過基因槍轟擊將瞬時表達載體和1301載體轉化水稻品種CO39和其抗稻瘟的近等基因系Pi9(C751)水稻葉片，使其共表達。結果發(fā)現(xiàn)在Pi9的水稻葉片中GUS表達量較CO39中的GUS表達量明顯降低，但剪切信號肽與否對GUS表達量似乎沒有影