組蛋白去乙酰化酶參與番茄抗青枯病的機制研究.pdf

1、目的：
　　由茄科雷爾氏菌（Ralstonia solanacearum）感染番茄引起的青枯病（Bacterial wilt）是導致番茄減產(chǎn)的重要原因；組蛋白去乙?；福℉istone deacetylases，HDACs）主要參與植物的形態(tài)發(fā)育和應對冷、干旱、抗病等外界脅迫過程；本論文通過生物信息學研究發(fā)現(xiàn)番茄含有15個HDACs，通過組織表達、氧化脅迫，及抗感病品種接種青枯菌條件下乙?；揎椬兓涂共arker基因ChIP-

2、QPCR分析，對組蛋白乙?；瘏⑴c番茄抗青枯病的機制進行研究，為利用分子生物學技術和基因工程手段改良番茄青枯病抗性奠定堅實的基礎。
　　方法：
　　利用生物信息學分析番茄組蛋白去乙酰化酶相關基因，并通過 GEO芯片分析以及Q-PCR驗證番茄各個組織及脅迫處理條件下的表達差異。利用Western-blot分析抗感品種中組蛋白去乙?；富虻谋磉_差異、運用ChIP和Q-PCR分析抗青枯病Marker基因的表達差異及 H3和H4乙酰

3、化修飾變化。構(gòu)建 pCanGmyc-SlHDT3和pYLRNAi5-35S-SlHDT3表達載體。通過篩選獲得最適的卡那霉素和潮霉素濃度，對番茄Henz1706遺傳轉(zhuǎn)化體系進行優(yōu)化。在獲得轉(zhuǎn)基因植株后，利用普通PCR對番茄Henz1706基因組中外源基因新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因（NptⅡ）和潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPT）基因進行檢測。
　　結(jié)果：
　　1.通過生物信息學分析得到15個番茄組蛋白去乙?；富?，存在組織表達差異且受氧化

4、脅迫和青枯病響應。
　　2.在接種青枯菌條件下，SlHDA6、SlHDA9和SlHDA10在抗病品種中上調(diào)表達，感病品種下調(diào)表達；SlHDA8、SlHDT1、SlHDT3和SlHSRT1在抗病品種中下調(diào)表達，感病品種上調(diào)表達；其它基因在抗感品種均上調(diào)表達。
　　3.在接種青枯菌條件下，ERF、WRKY等轉(zhuǎn)錄因子和激素通路Marker基因在抗病品種上調(diào)表達，感病品種下調(diào)表達；其中轉(zhuǎn)錄因子SlCBF1、SlPti5、SlWRKY

5、39、SlWRKY80表達差異最大。
　　4.轉(zhuǎn)錄因子ERF，如SlCBF1、SlPti5等乙?；剑℉3ac、H4ac）在抗病品種中增加且通過乙?；揎梾⑴c抗番茄青枯病的過程。
　　5.組蛋白去乙?；敢种苿═SA）處理可促使番茄感病品種的抗病性增加。
　　6. Henz1706番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系中最適的卡那霉素和潮霉素篩選濃度：20 mg/L Kan和4 mg/L Hyg。
　　7.成功構(gòu)建pCanGmyc

6、-SlHDT3和pYLRNAi5-35S-SlHDT3表達載體；分別獲得pCanGmyc-SlHDT3和pYLRNAi5-35S-SlHDT3陽性轉(zhuǎn)化植株5株和6株。
　　結(jié)論：
　　本研究通過番茄組蛋白去乙酰化酶相關基因的生物信息學和氧化脅迫分析，闡明番茄組蛋白去乙?；赋蓡T組成及其在氧化脅迫中的關系；通過比較番茄抗病和感病品種間的組蛋白去乙酰化基因的差異、接種青枯菌條件下抗病 Marker基因的組蛋白修飾變化、以及 TS