絲素蛋白-殼聚糖支架復(fù)合BMSCs修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的研究.pdf

1、目的：探討符合軟骨組織工程支架材料要求的絲素蛋白(Silk fibroin，SF)/殼聚糖(chitosan，CS)三維支架材料制備方法，以及與誘導(dǎo)后兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的生物相容性；探索SF-CS三維支架復(fù)合誘導(dǎo)后BMSCs修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的可行性。
　　 方法：
　　 1、將從蠶絲中提取的2％SF溶液與2％CS溶液按體積1:1的比例混合，應(yīng)用冷凍干燥和化學(xué)交聯(lián)法制備SF-CS復(fù)合材料。觀察復(fù)合材料的超

2、微結(jié)構(gòu)，檢測(cè)其孔徑大小、孔隙率及生物力學(xué)。從兔骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs，并對(duì)其進(jìn)行鑒定和誘導(dǎo)，將成功誘導(dǎo)后的BMSCs接種在SF-CS支架上體外共培養(yǎng)，用倒置顯微鏡和掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況。
　　 2.將成功誘導(dǎo)后的BMSCs接種在SF-CS生物支架上構(gòu)成修復(fù)體。54只5～6月齡兔，隨機(jī)分為細(xì)胞支架修復(fù)體組、單純支架組和對(duì)照組，每組18只；采用右膝關(guān)節(jié)制備軟骨缺損模型并植入支架。術(shù)后4、8、12周取材進(jìn)行大體觀察，組

3、織學(xué)染色和改良Wakitani法組織學(xué)評(píng)分；12周掃描電鏡觀察。
　　 結(jié)果：
　　 1、SF-CS支架為相通性好的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑大小為(90-280)μm，平均孔徑為151.72μm，孔隙率為(92.72％±4.78％)，彈性模量為28.10±1.58 MPa，壓縮強(qiáng)度為0.65±0.02MPa；BMSCs誘導(dǎo)后在SF-CS支架上生長(zhǎng)良好，增殖活躍。
　　 2、12周時(shí)，支架修復(fù)體組軟骨缺損基本修復(fù)，Ⅱ型膠原和

4、糖胺多糖明顯的陽(yáng)性反應(yīng)，生物材料基本吸收；單純支架組以纖維樣組織修復(fù)為主，Ⅱ型膠原和糖胺多糖陽(yáng)性反應(yīng)弱，未見(jiàn)支架殘留；空白對(duì)照組修復(fù)不良；改良Wakitani評(píng)分顯示支架修復(fù)體組優(yōu)于單純支架組和對(duì)照組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、應(yīng)用冷凍干燥和化學(xué)交聯(lián)法制備SF-CS三維支架材料具有良好的理化性質(zhì)及良好的細(xì)胞相容性；
　　 2、SF-CS支架材料可作為BMSCs的載體進(jìn)行軟骨缺損的修復(fù)，此支架有望成