乙肝病毒X蛋白通過激活c-myc誘導(dǎo)肝卵圓細胞惡性轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、研究背景:
　　肝癌目前已經(jīng)成了嚴重威脅人類健康和生命的重大疾病。由于肝癌有起病隱匿、發(fā)展快等特點,很多臨床確診患者已屬晚期。因此,深入探討肝癌發(fā)生及發(fā)展的原因已經(jīng)成為了醫(yī)學(xué)上的熱門方向。我們前期的研究已經(jīng)證實了乙型肝炎病毒X蛋白可以誘導(dǎo)肝卵圓細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,那么HBx蛋白又是如何引起肝卵圓細胞惡性轉(zhuǎn)化,聯(lián)系兩者之間的“橋梁”又是什么,這已經(jīng)成為我們一個亟需解決的問題。
　　目的:
　　研究HBx蛋白對c-myc表達

2、的影響;探討c-myc特異性siRNA對乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X, HBx)誘導(dǎo)卵圓細胞惡性轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法:
　　通過HEK293T細胞擴增腺病毒獲得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HBx,分別感染肝卵圓細胞株WB-F344細胞,獲得穩(wěn)定表達HBx的WB-F344-HBx細胞,通過RT-PCR和Western blot檢測其與對照組WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP兩組

3、細胞的c-myc的表達的差異,驗證 HBx蛋白對 c-myc表達的影響。應(yīng)用特異性對應(yīng) c-myc基因的siRNA轉(zhuǎn)染各組細胞,運用體外成瘤法、流式細胞術(shù)、細胞遷移等實驗,觀察 c-myc特異性siRNA對HBx誘導(dǎo)卵圓細胞惡性轉(zhuǎn)化的影響。
　　結(jié)果:
　　與轉(zhuǎn)染了空白對照組WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP的細胞相比,轉(zhuǎn)染了HBx的實驗組WB-F344-HBx,細胞中的c-myc在RNA及蛋白水平的表達明顯

4、增高。細胞在 c-myc基因沉默前,WB-F344-HBx細胞 G0/G1期細胞比例顯著降低、S期細胞比例顯著升高;第1d3組細胞都以單細胞形式懸浮生長,隨著時間延長, WB-F344-HBx細胞逐漸形成致密的細胞球體并且數(shù)量逐漸增多、體積逐漸增大;WB-F344-HBx細胞的遷移能力顯著高于對照組,WB-F344-Mock和 WB-F344-EGFP組之間各項指標(biāo)均無明顯差異;而c-myc基因沉默后,WB-F344-Mock、WB-F