癲癇大鼠海馬DG區(qū)增殖的內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的演變及基因工程細胞移植治療癲癇大鼠的實驗研究.pdf

1、癲癇是一組由多種病因引起的慢性腦功能障礙綜合癥，是大腦神經(jīng)元異常放電所引起的發(fā)作性、突然性、短暫性腦功能紊亂。我國的癲癇發(fā)病率為1‰左右，而患病率為0.5％～1％，癲癇是影響腦發(fā)育的重要疾患。因此對癲癇發(fā)病機制以及治療方法的研究顯得尤為重要。近年來，國內(nèi)外對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有增殖和分化能力的內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的研究頗多，多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病可引起內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的增殖，包括外傷、缺血缺氧、癲癇等。本課題組前期研究已證實，癲癇發(fā)作可引起大鼠海

2、馬DG區(qū)內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的增殖，并在初次發(fā)作后兩周左右達到高峰。本實驗在此基礎(chǔ)上研究這些增殖的內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的遷移、分化及演變過程，探討增殖的海馬區(qū)內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞與癲癇發(fā)作的相互作用，為細胞治療癲癇提供理論依據(jù)。 近年來，在藥物治療研究的同時，細胞移植替代治療成為多種神經(jīng)系統(tǒng)的疾病治療最為熱門的研究，而且取得了一定的成果。構(gòu)建合成和分泌多巴胺的細胞移植治療帕金森氏病、合成和釋放GABA細胞治療亨廷頓病及分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子

3、細胞治療缺血缺氧性疾病等都取得了一定的成果。而且眾多的神經(jīng)前體細胞、干細胞、胚胎干細胞的培養(yǎng)和移植治療也有了很大的進展。在癲癇的治療方面，也有了很多細胞治療的研究，80年代就有將富含去甲腎上腺素的藍斑神經(jīng)元移植到雙側(cè)海馬治療癲癇的實驗研究;將膽堿能神經(jīng)元、胚胎海馬CA3區(qū)細胞移植治療的實驗研究等，這些細胞的移植對癇性發(fā)作有不同程度的抑制作用。但這些方法都有細胞取材困難、來源有限、存在免疫源性、體內(nèi)存活時間不長等缺點。于是又出現(xiàn)了將神經(jīng)干

4、細胞、胚胎干細胞等前體細胞用于癲癇大鼠的移植研究，雖然這些細胞能在體外大量擴增，但是移植后在腦內(nèi)的抗癇作用不確定，具體分化方向也不明，不能加以控制。最近細胞移植的研究集中在基因工程細胞的構(gòu)建及移植治療研究上，這些構(gòu)建的細胞能在體外擴增并按需合成和分泌相關(guān)神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)遞質(zhì)或酶等。基于上述研究，本實驗構(gòu)建能合成和分泌GABA的永生化的神經(jīng)前體細胞和膠質(zhì)細胞，這些細胞能在體外大量擴增，穩(wěn)定表達目的基因GAD65，將這種構(gòu)建好的神經(jīng)前體細

5、胞移植到匹羅卡品誘導(dǎo)的慢性自發(fā)發(fā)作的癲癇大鼠海馬內(nèi)，觀察其存活狀況及對癲癇的治療作用。 第一部分癲癇大鼠海馬DG區(qū)增殖的內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞演變過程的研究 目的：追蹤觀察匹羅卡品誘導(dǎo)癲癇大鼠模型海馬DG區(qū)增殖的內(nèi)源性神經(jīng)前體細胞的遷移、分化及演變過程，并探討增殖的神經(jīng)前體細胞與癲癇發(fā)作的相互作用。 結(jié)論：癲癇發(fā)生后大鼠海馬DG區(qū)出現(xiàn)神經(jīng)前體細胞的增殖、遷移及分化，即出現(xiàn)了神經(jīng)發(fā)生和可塑性改變。這些增殖遷移的細胞大多

6、數(shù)分化為神經(jīng)元，但只有少部分細胞存活下來參與海馬結(jié)構(gòu)的重建。 第二部分能合成和分泌GABA的永生化神經(jīng)前體細胞和星形膠質(zhì)細胞的構(gòu)建 目的：構(gòu)建能合成和分泌GABA(gamma-aminobutyricacid,GABA)的永生化神經(jīng)前體細胞和星形膠質(zhì)細胞。 結(jié)論：永生化的神經(jīng)前體細胞和星形膠質(zhì)細胞中轉(zhuǎn)入GAD65質(zhì)粒后，細胞能穩(wěn)定表達GAD65，并且能合成和分泌GABA。 第三部分能合成和分泌GABA的神