氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇大鼠海馬區(qū)腦白質(zhì)損傷的初步研究.pdf

1、本文內(nèi)容分為三部分進(jìn)行了論述
　　第一部分 氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇大鼠模型建立
　　目的:
　　建立氯化鋰-匹羅卡品慢性癲癇大鼠模型，通過(guò)行為學(xué)和腦電圖監(jiān)測(cè)，評(píng)價(jià)該模型的成功率。
　　方法:
　　采用6-8周成年SD大鼠，氯化鋰(127mg/kg)腹腔注射，24h后予以匹羅卡品(45mg/kg)腹腔注射，待模型組大鼠癲癇發(fā)作級(jí)別達(dá)到RacineⅣ級(jí)以上，并持續(xù)30min后地西泮(10mg/kg)終止癇

2、性發(fā)作，對(duì)照組大鼠采用生理鹽水代替匹羅卡品腹腔注射。于建模后第10天開(kāi)始Video連續(xù)120h監(jiān)測(cè)慢性癲癇組和對(duì)照組行為學(xué)變化，了解大鼠癇樣發(fā)作情況，于造模后第28天采用腦電圖(EEG)檢測(cè)慢性癲癇組大鼠和同期對(duì)照組大鼠1.5h的腦電情況。
　　結(jié)果:
　　本實(shí)驗(yàn)共致癇大鼠14只，對(duì)照組6只，致癇組中13只大鼠于注射匹羅卡品后約20-35min出現(xiàn)癇樣發(fā)作，發(fā)作級(jí)別達(dá)到RacineⅣ級(jí)以上，并持續(xù)30min，致癇組中3只于建

3、模后1周內(nèi)死亡，癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus，SE)建模成功率為71.4％，對(duì)照組大鼠均未出現(xiàn)癇樣發(fā)作或死亡。于建模后12±2天，可觀察到致癇組大鼠面部咀嚼運(yùn)動(dòng)、點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)或一側(cè)前肢陣攣;且呈自發(fā)性反復(fù)性發(fā)作(spontaneous recurrent seizures，SRS)。視頻錄像分析發(fā)現(xiàn)致癇組7只大鼠出現(xiàn)RacineⅢ級(jí)以上癇性發(fā)作，3只有RacineⅡ級(jí)癇性發(fā)作，同期對(duì)照組無(wú)癇樣發(fā)作情況，慢性癲癇組入組7

4、只大鼠，慢性癲癇(spontaneousrecurrent seizures.SRS)模型建模成功率為50％。
　　建模后第21天，對(duì)慢性癲癇組和對(duì)照組大鼠均進(jìn)行腦電極埋放手術(shù)，術(shù)后3天內(nèi)慢性癲癇組3只未達(dá)RacineⅢ級(jí)以上癇性發(fā)作的大鼠死亡，對(duì)照組死亡1只。于建模后第28天，腦電圖結(jié)果提示對(duì)照組大鼠腦電圖基本節(jié)律以α，β波為主，少量θ，δ波，并且未觀察到尖波發(fā)放，癲癇組的腦電圖檢測(cè)以θ，δ波為主，α，β波減少，并且觀察到尖波發(fā)

5、放。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)成功建立氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇模型，癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)建模成功率為71.4％，慢性癲癇(SRS)模型建模成功率為50％。
　　第二部分 氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇大鼠與同期對(duì)照大鼠海馬區(qū)DTI隨訪研究
　　目的:
　　本研究采用核磁共振擴(kuò)散張量成像(Diffusion Tensor Imaging，DTI)技術(shù)檢測(cè)并比較氯化鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)的慢性癲癇大鼠組及正常對(duì)照組在

6、建模前后海馬區(qū)的改變情況。
　　方法:
　　慢性癲癇大鼠模型建立及分組同第一部分。在氯化鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)癲癇建模前7天和建模后第56±4天，用GE公司3.0T磁共振掃描儀對(duì)兩組大鼠進(jìn)行T1WI，T2WI和DTI檢查，并用Image J軟件采用ROI(region of interest)法測(cè)量并比較慢性癲癇組和對(duì)照組大鼠海馬區(qū)域的ADC值((Apparent diffusioncoefficient, ADC)及FA值(Fr

7、actional anisotropy, FA)。
　　結(jié)果:
　　建模前7天致癇組(n=7) ADC值和FA值較對(duì)照組(n=5) ADC值和FA值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。慢性癲癇(SRS)組大鼠建模后2月ADC值為10.686E-10±3.121E-10較建模前7天ADC值:6.493E-10±1.451E-10，ADC值顯著升高，P＜0.01。慢性癲癇(SRS)組大鼠建模后2月FA值為0.370±0.127較建模前7

8、天FA值:0.459±0.080，F(xiàn)A值顯著下降，P＜0.01。對(duì)照組大鼠建模后2月ADC值和FA值較建模前7天ADC值和FA值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。慢性癲癇(SRS)組大鼠建模后2月ADC值為10.686E-10±3.121E-10較同期對(duì)照組ADC值:7.258E-10±0.576E-10，ADC值顯著升高，P＜0.01。慢性癲癇(SRS)組大鼠建模后2月FA值為0.370±0.127較同期對(duì)照組FA值:0.419±0.135

9、，F(xiàn)A值顯著下降，P＜0.05。
　　結(jié)論:
　　DTI檢測(cè)結(jié)果顯示氯化鋰-匹羅卡品致慢性癲癇模型組致癇2月后海馬區(qū)較正常對(duì)照組FA值顯著下降，ADC值顯著升高，提示海馬區(qū)域可能存在白質(zhì)損傷。
　　第三部分 氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇大鼠與同期對(duì)照大鼠海馬區(qū)少突膠質(zhì)細(xì)胞變化的研究
　　目的:
　　采用免疫熒光染色法研究慢性癲癇組和對(duì)照組大鼠海馬區(qū)域少突膠質(zhì)細(xì)胞及其前體細(xì)胞的變化，探討海馬區(qū)域DTI改變的可

10、能機(jī)制。
　　方法:
　　慢性癲癇大鼠模型建立及分組同第一部分，于建模后第56±4天DTI掃描后，進(jìn)行大鼠灌流取腦組織制備冰凍切片，采用免疫熒光染色方法和計(jì)算機(jī)軟件Image Pro Plus進(jìn)行定量分析和比較慢性癲癇組和同期對(duì)照組海馬區(qū)域髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein，MBP)和硫酸軟骨素蛋白多糖(Chondroitinsulfate proteoglycan NG2)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:

11、
　　慢性癲癇(SRS)組MBP在海馬CA1區(qū)熒光強(qiáng)度為0.0235±0.000842較同期對(duì)照組0.0315±0.000780，顯著下降，P＜0.01。慢性癲癇(SRS)組MBP在海馬CA3區(qū)熒光強(qiáng)度為0.0190±0.000947較同期對(duì)照組0.0271±0.00104，顯著下降，P＜0.01。慢性癲癇(SRS)組MBP在海馬DG區(qū)熒光強(qiáng)度為0.0149±0.000901較同期對(duì)照組0.0282±0.000862，顯著下降，P

12、＜0.01。
　　慢性癲癇(SRS)組NG2在海馬CA1區(qū)熒光強(qiáng)度為0.00456±0.000291較同期對(duì)照組0.00320±0.000390，顯著升高，P＜0.05。慢性癲癇(SRS)組NG2在海馬CA3區(qū)熒光強(qiáng)度為0.00319±0.000178較同期對(duì)照組0.00196±0.000170，顯著升高，P＜0.01。慢性癲癇(SRS)組NG2在海馬DG區(qū)熒光強(qiáng)度為0.00923±0.000591較同期對(duì)照組0.00257±0.

13、000273，顯著升高， P＜0.01。
　　結(jié)論:
　　氯化鋰-匹羅卡品致慢性癲癇模型組海馬CA1，CA3，DG區(qū)MBP較正常對(duì)照組顯著下降，NG2較正常對(duì)照組顯著升高，提示海馬區(qū)域少突膠質(zhì)細(xì)胞可能參與了海馬區(qū)域的白質(zhì)損傷。
　　全文小結(jié)
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功建立氯化鋰-匹羅卡品致癇慢性癲癇模型，慢性癲癇(SRS)模型建模成功率為50％。
　　2.本實(shí)驗(yàn)DTI檢測(cè)結(jié)果顯示氯化鋰-匹羅卡品致慢性癲癇模型組海馬