利用肺癌特異性結合多肽ZS6篩選肺癌相關腫瘤標志物.pdf

1、目的：利用本實驗室已獲得的與肺癌特異性結合的十二肽ZS6從人類肺癌cDNA文庫中篩選出肺癌相關標志物，并對相關的標志物在肺癌形成中的作用進行初步研究，為肺癌的臨床早期診斷和治療奠定基礎。
　　 方法：通過化學方法合成多肽ZS6并部分標記綠色熒光素異硫氰酸(FITC)。利用細胞免疫熒光、組織免疫熒光鑒定多肽ZS6-FITC與人肺癌細胞、人肝癌細胞、人結腸癌細胞、人肺癌組織結合的親和力和特異性。然后，通過多肽ZS6-FITC在荷瘤裸

2、鼠體內的分布實驗觀察ZS6在荷人肺癌A549裸鼠體內的分布情況，使用液相色譜法測定多肽ZS6的體外穩(wěn)定性及其在大鼠體內代謝分布情況。為了進一步研究多肽ZS6與肺癌的結合位點，我們以生物素標記的十二肽ZS6為探針，通過化學方法合成生物素(Biotin)偶聯(lián)的多肽ZS6，將ZS6 Biotin固定在親和素(avidin)包被的酶標板板上，篩選人類肺癌cDNA噬菌體展示文庫，經過四輪減性篩選后，挑取與ZS6特異性結合的噬菌體單克隆、擴增、純化

3、，再通過PCR技術擴增、產物純化后，進行DNA測序，測序結果經過生物信息學分析。
　　 結果：篩選出18個與ZS6特異性結合的T7噬菌體克隆，所得結果在美國國立生物技術信息中心Blast數據庫(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)進行比對得出5種蛋白，其中出現頻率最高的是GSTA1，所占比例為44.4[％]。其余的均已確定為腫瘤相關基因。
　　 結論：從人類肺癌cDNA噬菌體展示文庫中篩選得到潛在的肺癌