組蛋白去乙?；敢种苿㎜BH589抑制膠質(zhì)母細(xì)胞A172增殖及誘導(dǎo)凋亡機制研究.pdf

1、目的：探討組蛋白乙?；敢种苿㎜BH589對膠質(zhì)母細(xì)胞A172抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用及膠質(zhì)母細(xì)胞相關(guān)蛋白P53、BCL-2、BAX表達的規(guī)律和意義。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系A(chǔ)172種植于96孔板，并隨機分成：A1組(對照組)，B1組(LBH58910nmol/L組)，C1組(LBH58920nmol/L組)，D1組(LBH58930nmol/L組)，E1組(LBH58940nmo

2、l/L組)及F1組(LBH58950nmol/L)。
　　 應(yīng)用四氮唑比色(MTT)法，分別在24h、48h、72h時間點，檢測各組膠質(zhì)母細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞增殖情況。并在相差顯微鏡200倍下，觀察48h時細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化并拍照。
　　 2.根據(jù)MTT法結(jié)果，當(dāng)LBH589在劑量為20nmol/L、30nmol/L、40nmol/L時，可出現(xiàn)顯著抑制A172細(xì)胞的生長，但隨著時間及劑量增加而抑制率變化不大。將細(xì)胞種植于6

3、孔板后，隨機分成：A2組(對照組)，B2組(LBH58910nmol/L組)，C2組(LBH58920nmol/L組)及D2組(LBH58950nmol/L組)。觀察對照組及實驗組在48h時A172細(xì)胞的遷移能力，并用相差顯微鏡拍照。流式細(xì)胞術(shù)檢測對照組及實驗組A172細(xì)胞在48h時周期變化及細(xì)胞的凋亡率。應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測相關(guān)蛋白P53、BCL-2、BAX在膠質(zhì)母細(xì)胞內(nèi)的表達。通過免疫組化技術(shù)檢測相關(guān)蛋白P53、BCL-2、BA

4、X經(jīng)對照組及實驗組在48h時LBH589對膠質(zhì)母細(xì)胞系A(chǔ)172的干預(yù)變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTT法檢測表明，采用不同濃度梯度及不同時間梯度LBH589干預(yù)膠質(zhì)母細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞，細(xì)胞增殖差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 2、相差顯微鏡檢查結(jié)果：細(xì)胞形態(tài)學(xué)上可見，LBH589處理48h后膠質(zhì)母細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞與對照組之間有明顯改變。
　　 3、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果：LBH589干

5、預(yù)A172細(xì)胞可以誘導(dǎo)凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞周期G0-G1期阻滯。
　　 4、細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果：在A172細(xì)胞胞核及細(xì)胞質(zhì)中均存在BAX、P53、BCL-2。
　　 5、細(xì)胞免疫組化檢測：A172細(xì)胞經(jīng)LBH589干預(yù)后可以上調(diào)相關(guān)蛋白BAX、P53，下調(diào)抗凋亡蛋白BCL-2。
　　 結(jié)論：組蛋白乙?；敢种苿㎜BH589可有效抑制人腦膠質(zhì)母細(xì)胞A172細(xì)胞增殖生長，存在時間-濃度依賴性，引起A172細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)，阻