黃芩苷對轉化生長因子β1誘導的人肺動脈平滑肌細胞增殖的干預作用.pdf

1、[目的]
　　 黃芩苷作為黃芩的有效提取成分之一，其在擴張血管和抑制血管平滑肌細胞的增殖方面有較強的藥理作用，然而它防治肺動脈高壓和干預肺血管重構的功能尚不清楚。本研究通過轉化生長因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)誘導人肺動脈平滑肌細胞(HPASMCs)增殖，建立HPASMCs過度增殖的細胞模型，進而探討不同濃度、作用時間的黃芩苷對其增殖干預的作用和可能的分子機制。
　　

2、[方法]
　　 1.收集肺動脈高壓患者的肺組織，分別采用免疫熒光和免疫組化方法檢測肺血管組織和HPASMCs中缺氧誘導因子1α(hypoxia inducible factor1 alpha，HIF1α)、芳香族化合物受體(aryl hydrocarbon receptor, AhR)的表達和亞細胞定位。
　　 2.將HPASMCs細胞用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，細胞免疫熒光方法鑒定，實驗分為5組:空

3、白對照組、TGF-β1組(TGF-β110μg/l)、干預1組（TGF-β110μg/l+黃芩苷5μmol/l）、干預2組(TGF-β110μg/l+黃芩苷10μmol/l)、干預3組（TGF-β110μg/l+黃芩苷20μmol/l）、干預4組（TGF-β110μ g/l+黃芩苷40μmol/l），在激光共聚焦顯微鏡下觀察TGF-β1誘導下細胞形態(tài)和表型的改變，并通過CCK-8法檢測黃芩苷對細胞增殖的影響，RT-PCR檢測增殖相關基因

4、HIF1α、AhR的表達變化。
　　 [結果]
　　 1.明確了肺動脈高壓患者肺組織及HPASMCs中AhR、HIF1α的表達及其在細胞質中定位情況。
　　 2.CCK-8結果顯示，10μg/l的TGF-β1處理48 h的條件對HPASMCs增殖的誘導效果最為明顯。
　　 3.細胞免疫熒光可見經TGF-β1誘導的HPASMCs合成型標志物分泌磷酸蛋白1(secreted phosphoprotein1，S

5、PP1)明顯表達。
　　 4.CCK-8結果顯示，黃芩苷可抑制TGF-β1誘導的HPASMCs增殖，并呈依賴于劑量和時間的量效關系。
　　 5.RT-PCR結果顯示，黃芩苷呈濃度依賴性抑制HPASMCs中AhR、HIF1α的表達。
　　 [結論]
　　 肺動脈高壓患者肺組織及HPASMCs中有HIF1α、AhR的表達，TGF-β1可誘導HPASMCs的增殖，以10μ g/l濃度作用48 h條件下的效果最為