腦膠質(zhì)瘤中NEDD4-1調(diào)節(jié)烏苷酸交換因子CNrasGEF泛素化作用的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的：檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中NEDD4-1對(duì)鳥(niǎo)苷酸交換因子CNrasGEF的泛素化作用，探討NEDD4-1調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及遷移的機(jī)制。
　　 方法：(1)采用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法將NEDD4-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中，應(yīng)用蛋白免疫共沉淀(CoIP)結(jié)合免疫印跡(IB)法，觀察外源的NEDD4-1和內(nèi)源性CNrasGEF的相互作用；(2)共表達(dá)NEDD4-1和ubiquitin，用蛋白免疫共沉淀(CoIP)結(jié)合免疫印跡(IB)法

2、，檢測(cè)NEDD4-1對(duì)內(nèi)源的CNrasGEF的泛素化作用；(3)共表達(dá)NEDD4-1和ubiquitin的同時(shí)，用蛋白酶體抑制劑MG132處理，觀察CNrasGEF水平的改變。
　　 結(jié)果：(1)轉(zhuǎn)染NEDD4-1質(zhì)粒后，外源性表達(dá)的NEDD4-1可與內(nèi)源性CNrasGEF共沉淀；(2)共表達(dá)NEDD4-1和ubiquitin后，NEDD4-1對(duì)內(nèi)源的CNrasGEF有泛素化作用，CNrasGEF能與泛素共沉淀；(3)共表達(dá)NE

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