B7-H1在腦膠質(zhì)瘤中對Treg細胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、腫瘤是當(dāng)今社會嚴(yán)重威脅人類健康的最主要疾病之一,尋找治療腫瘤的有效方法是醫(yī)學(xué)工作者的一個非常重要的課題。由于腫瘤組織存在主動的免疫逃逸機制,因此目前的多種免疫治療方法效果并不明顯。腫瘤細胞針對機體的抗腫瘤免疫,采取多種方法逃避免疫清除,其中PD-L1(B7-H1)/PD-1信號系統(tǒng)和調(diào)節(jié)性T細胞是腫瘤逃避免疫清除最為重要的兩種途徑。B7-H1在多種腫瘤細胞及其相關(guān)細胞表面高表達;而腫瘤浸潤的T淋巴細胞中Treg細胞的比例也異常升高。B7

2、-H1與PD-1結(jié)合,產(chǎn)生免疫抑制性信號;而Treg細胞則通過直接或間接的免疫抑制作用,降低腫瘤特異性T淋巴細胞的活性,幫助腫瘤逃避免疫清除。最新的研究發(fā)現(xiàn),B7-H1分子是誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)性T淋巴細胞發(fā)育和功能維持的重要分子,單獨的B7-H1信號即可以將初始CD4+CD25-T細胞轉(zhuǎn)化成Treg細胞,發(fā)揮免疫抑制作用。但在腫瘤免疫逃逸過程中,B7-H1發(fā)揮免疫抑制作用是否通過,或多大程度上通過誘導(dǎo)Treg細胞而實現(xiàn)的,目前尚沒有答案。本課題

3、擬通過膠質(zhì)瘤細胞系與na?veT細胞的共培養(yǎng),研究腫瘤細胞表達的B7-H1是如何通過調(diào)節(jié)Treg細胞來實現(xiàn)腫瘤的免疫逃逸;并通過干預(yù)腫瘤B7-H1的表達,建立抑制腫瘤免疫逃逸的新思路。該研究結(jié)果可以深入了解腫瘤的免疫逃逸機理,從而尋找到克服腫瘤免疫逃逸的方法,提出新的腫瘤治療策略,對提高腫瘤免疫清除和治愈腫瘤具有非常重要的理論和實際應(yīng)用價值。
　　目的:
　　闡明腫瘤細胞表達B7-H1分子發(fā)揮免疫抑制作用與誘導(dǎo)Treg細胞產(chǎn)

4、生的關(guān)系,從而進一步闡明B7-H1分子的腫瘤免疫抑制機理,探索干涉腫瘤細胞B7-H1分子對抑制腫瘤免疫逃逸的作用。
　　方法:
　　1.分別利用免疫組織化學(xué)法和免疫熒光法檢測腦膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本中的B7-H1分子的表達情況及Treg細胞在腫瘤中的浸潤。
　　2.用流式細胞儀檢測人膠質(zhì)瘤細胞系中B7-H1分子的表達,并挑選出高表達B7-H1分子的細胞株。
　　3.構(gòu)建含針對B7-H1分子的shRNA慢病毒表達載體,感染

5、高表達B7-H1分子的膠質(zhì)瘤細胞株,利用westernblot和qRT-PCR檢測其干涉效果。
　　4.在正常人靜脈血中分離出外周血單個核細胞(PBMC),然后利用免疫磁珠法分選出naveT細胞,并檢測分選純度。
　　5.用CD3和CD28抗體刺激na?veT細胞,使其活化。
　　6.把干涉B7-H1分子表達的膠質(zhì)瘤細胞和正常表達B7-H1分子的膠質(zhì)瘤細胞分別與從人血中分離出的naveT細胞共培養(yǎng),然后用Treg細胞檢

6、測試劑盒檢測na?veT細胞向Treg細胞分化的程度。
　　結(jié)果:
　　1.我們?nèi)〉?0例膠質(zhì)瘤標(biāo)本(未分級),用免疫組化染色觀察到了B7-H1分子在7例中都有表達。并且3例Treg細胞浸潤較多的組織其B7-H1分子的表達也呈陽性。
　　2.我們運用流式細胞儀檢測了5株人腦膠質(zhì)瘤細胞系中B7-H1的表達,發(fā)現(xiàn)在其中三株都有較高表達。并選取U251細胞進行后續(xù)試驗。
　　3.分選出的na?veT細胞,經(jīng)過CD3和C

7、D28抗體的共刺激,觀察到T淋巴細胞的增殖,說明na?veT細胞得到成功活化。
　　4.TGF-β在誘導(dǎo)分化Treg細胞的過程中發(fā)揮著重要的作用。
　　5.B7-H1可以協(xié)同TGF-β促使naiveT細胞向Treg細胞方向分化。
　　主要結(jié)論:
　　本實驗在細胞水平證實了B7-H1分子能夠促進naveT細胞向Treg細胞方向的分化,而Treg細胞負向調(diào)控所有適應(yīng)性免疫,對于腫瘤的免疫逃逸具有重要的貢獻作用。腫瘤組