四環(huán)素免疫層析試紙條檢測方法的研究.pdf

1、本研究建立了四環(huán)素膠體金免疫層析檢測方法，并應(yīng)用于動物源性食品中四環(huán)素的快速檢測。
　　利用甲醛法將四環(huán)素與陽離子化的牛血清白蛋白(cBSA)偶聯(lián)制備包被抗原(TC-cBSA)。采用Protein A—— Sepharose4B免疫親和層析法純化四環(huán)素特異性抗血清獲得四環(huán)素多克隆抗體。采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為20 nm的膠體金，優(yōu)化得到制備金標抗體的最適pH為8.0，最適抗體量為24μL。
　　通過各種條件的優(yōu)化，將包

2、被抗原(TC-cBSA)1∶1稀釋、羊抗兔二抗1∶100稀釋，分別固定在硝酸纖維素薄膜上作為檢測線和質(zhì)控線，將金標抗體1∶3稀釋噴涂到0.05％SDS-L處理的金標摯上，經(jīng)過組裝制成四環(huán)素膠體金免疫層析試紙條。四環(huán)素免疫層析試紙條的檢出限:在標準品溶液中的視覺檢出限均為40μg/L，檢測時間為5 min。
　　對牛奶進行離心稀釋處理，蜂蜜稀釋處理，豬肉、牛肉、雞肉、魷魚、大眼鯛魚、比目魚、蝦、三文魚和鱸魚用3％的三氯乙酸處理，直接

3、用試紙條進行檢測。其中牛奶的視覺檢出限為40μg/L，其余10種樣品的視覺檢出限為80μg/kg，均低于最高殘留限量(MRLs)。所建立的四環(huán)素免疫層析分析方法與酶聯(lián)免疫分析方法的一致性較好，說明方法有較好的準確性。
　　四環(huán)素免疫層析試紙條在室溫密封干燥的條件下保存，至少3個月檢測結(jié)果不受影響。特異性較好，操作方便、快速，結(jié)果穩(wěn)定、可靠，可作為四環(huán)素殘留的現(xiàn)場監(jiān)控篩檢手段。
　　本論文還對氧化石墨烯-膠體金免疫層析試紙條進