二價鎳對小鼠成纖維細胞生長的影響.pdf

1、研究背景及目的:
　　鎳在地殼元素含量中排第24位，人體不可避免地接觸這一元素。環(huán)境中主要的鎳污染主要來自煤炭和重油的燃燒以及煉油產(chǎn)生的三廢，瀝青等副產(chǎn)品。采礦、電鍍工業(yè)、垃圾焚燒和沙塵等也會造成鎳污染，通過水源、土壤、空氣等途徑進入人體，給人們身體健康帶來嚴重危害，影響人體正常生理過程。研究表明:小劑量鎳離子長時間作用于肺BEAS-2B細胞、正常皮膚上皮細胞后會導致細胞發(fā)生異常凋亡、甚至惡性轉化。二價鎳是鎳在生物體內的主要形態(tài)。

2、長期接觸二價鎳可能引起炎癥反應和致畸作用，并使約5％-15％的女性和0.5％-1％的男性致敏。世界衛(wèi)生組織已把鎳作為致癌因素之一，研究顯示:鎳與鼻及肺部癌癥的發(fā)生有關。
　　含鎳合金廣泛應用于烤瓷冠、局部可摘義齒等牙科治療領域。研究發(fā)現(xiàn):通過唾液的電化學腐蝕，口腔含鎳合金可緩慢析出鎳離子。鎳離子污染對口腔健康的影響，特別是鎳合金在口腔內廣泛運用后的生物安全性問題越來越引起人們的關注，但迄今為止，結論不一。臨床經(jīng)常發(fā)現(xiàn):鎳合金周圍可

3、見冠牙齦充血、變色。研究也發(fā)現(xiàn):含鎳合金冠析出鎳離子主要沉積在冠周圍的牙齦組織中。因此，了解鎳離子對牙齦或正?？谇簧掀さ挠绊懛浅１匾?br>　　研究方法:
　　本研究以小鼠成纖維細胞系PA317（由浙江大學附屬第一醫(yī)院王心華博士饋贈）為實驗對象，以不同濃度(0-800μM)的氯化鎳(NiCl2)作用。通過倒置顯微鏡下細胞形態(tài)觀察，Cell Counting Kit-8法檢測細胞增殖活力，流式細胞儀檢測細胞凋亡及細胞周期，West

4、ern Blot法檢測二價鎳對PA317細胞凋亡標志性蛋白p21蛋白，核轉錄因子κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）和環(huán)氧合成酶Ⅱ（cyclooxygenase2，COX-2）信號通路的表達情況，探討二價鎳對小鼠成纖維細胞的周期、凋亡的影響，并對二價鎳影響細胞生長影響的機制進行初步探討。
　　研究結果:
　　倒置顯微鏡下觀察細胞學形態(tài)發(fā)現(xiàn)，當二價鎳對小鼠成纖維細胞作用24 h時，

5、小鼠成纖維細胞隨二價鎳濃度升高而逐步出現(xiàn)細胞凋亡現(xiàn)象。細胞體積縮小，連接消失，與周圍的細胞脫離，懸浮細胞增多，細胞質呈明顯的空泡化。而當200μM二價鎳作用小鼠成纖維細胞時，隨二價鎳作用時間增長而凋亡率逐漸增高。二價鎳作用小鼠成纖維細胞24 h后，細胞G2/M期比例增加，細胞在二價鎳作用下，細胞周期阻滯在G2/M期。經(jīng)流式細胞儀分析，經(jīng)200μM、400μM、600μM、800μM濃度組二價鎳作用24 h后PA317細胞的凋亡率分別為5

6、.9％、17.0％、20.7％、63.4％呈一定的數(shù)量關系，Cell Counting Kit-8實驗證實了二價鎳濃度抑制細胞正常增殖之間的正相關性。同時，NF-κB，COX-2信號通路及p21蛋白的表達水平隨著二價鎳作用濃度和作用時間的增加而表現(xiàn)出逐漸上升的趨勢。
　　結論:
　　本研究表明，二價鎳對小鼠成纖維細胞的增殖起抑制作用，誘導其凋亡，NF-κB，COX-2信號通路及p21凋亡相關蛋白參與二價鎳促細胞凋亡過程，且與