四妙散對尿酸誘導的人腎小管上皮細胞(HK-2)TGF-β1、α-SMA及E-Cadherin表達的影響.pdf

1、目的:采用四妙散含藥血清干預尿酸誘導的人腎小管上皮細胞(HK-2)纖維化的模型，初步探討四妙散抗腎間質(zhì)纖維化的機理。
　　方法:1.采用不同濃度尿酸溶液刺激人腎小管上皮細胞，觀察形態(tài)學的改變，MTT檢測尿酸對細胞活力的影響，RT-PCR檢測細胞α-SMA，E-Cadherin mRNA的表達，制備腎間質(zhì)纖維化的模型。
　　2.四妙散含藥血清干預尿酸誘導的腎間質(zhì)纖維化的模型，觀察其對尿酸誘導的HK-2細胞形態(tài)影響，MTT法測定

2、各組細胞增殖活力，RT-PCR檢測各組細胞TGF-β1，α-SMA，E-Cadherin mRNA的表達，免疫組化法檢測各組細胞TGF-β1，α-SMA，E-Cadherin蛋白的表達。
　　結(jié)果:1.形態(tài)學結(jié)果顯示:正常組的人腎小管上皮細胞(HK-2)細胞呈現(xiàn)鋪路石狀，排列規(guī)整。模型組細胞數(shù)目的明顯減少，細胞形態(tài)拉長，變?yōu)樗笮?。MTT結(jié)果顯示24h的0.225mg/ml尿酸溶液能顯著抑制人腎小管上皮細胞(HK-2)的活性(P＜0

3、.01)。RT-PCR顯示，與正常組相比，模型組的α-SMAmRNA的表達升高，尤以24h的0.225mg/ml尿酸刺激組的升高顯著(P＜0.01)。而模型組的E-Cadherin mRNA的表達下降，尤以24h的0.225mg/ml尿酸刺激組的下降顯著(P＜0.01)。
　　2.在加入四妙散含藥血清干預后，隨著藥物濃度增加，貼壁細胞數(shù)目增加，形態(tài)逐漸由梭形變成鋪路石樣。MTT結(jié)果顯示:四妙散含藥血清能明顯促進尿酸誘導的人腎小管上

4、皮細胞(HK-2)細胞的活性，且呈現(xiàn)時間和劑量的依賴性，其中以24h高劑量的升高最為明顯(P＜0.01)。RT-PCR的結(jié)果顯示:在加入含藥血清干預24h后，α-SMA mRNA和TGF-β1 mRNA的表達下降，尤以高劑量組下降顯著(P＜0.01)。而四妙散干預的E-Cadherin mRNA表達升高，而E-Cadherin mRNA表達升高，尤以高劑量組升高顯著(P＜0.01)，和模型組相比，具有顯著性差異(P＜0.05）。免疫組化

5、顯示，α-SMA及TGF-β1蛋白的表達在正常組可見少量淺黃色陽性表達;模型組棕黃色陽性面積增多，部分區(qū)域呈深棕色，陽性表達強烈，其陽性目標總面積和IOD值明顯升高，與正常組相比具有顯著差異性(P＜0.01);在加入四妙散低、中、高劑量組，隨著劑量的增加陽性表達面積明顯減少，顏色變淺，四妙散含藥血清低、中、高劑量組TGFβ-β1陽性目標總面積和IOD值較模型組低(P＜0.05)，而高劑量組TGF-β1陽性目標總面積和IOD明顯降低，具有

6、顯著性差異(P＜0.01)。生理鹽水組與模型組相比變化不大。E-Cadherin的蛋白的表達在正常組可見棕黃色陽性表達;模型組黃色陽性面積減少，棕黃色變淺，其陽性目標總面積和IOD值明顯降低，與正常組相比具有顯著差異性(P＜0.01);在加入四妙散的低、中、高劑量組，隨著劑量的增加陽性表達面積增加，顏色逐漸變深，四妙散含藥血清低、中、高劑量組E-Cadherin陽性目標總面積和IOD值較模型組升高(P＜0.05)，而高劑量組E-Cadh

7、erin陽性目標總面積和IOD明顯升高，具有顯著差異性(P＜0.01)。生理鹽水組與模型組相比，變化不大。
　　結(jié)論:1.采用0.225mg/ml尿酸溶液刺激人腎小管上皮細胞(HK-2)24h，可以建立腎間質(zhì)纖維化的細胞模型。
　　2.四妙散含藥血清能明顯改善尿酸誘導的HK-2細胞形態(tài)學改變，預防腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。
　　3.四妙散下調(diào)尿酸誘導的纖維化模型的TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白的表達，上調(diào)E-Cad