IL-18對HK-2細胞E-cadherin表達的影響及其細胞內(nèi)通路的研究.pdf

1、【目的】 腎小管上皮細胞一肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymaltransdifferentiation，EMT)被認為在腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis，RIF)發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。而EMT發(fā)生的首要條件是上皮黏附特性的喪失。上皮細胞鈣黏蛋白(E-cadherin)的主要功能是建立和維持正常細胞間的連接，以維護上皮的完整性。IL-18在多種腎臟病中存在表達或分泌

2、異?，F(xiàn)象；在體外IL-18可使人近端腎小管上皮細胞系(HK-2細胞)發(fā)生EMT。我們推測白細胞介素-18(imerleukin-18，IL-18)對HK-2細胞的作用可能部分通過影響E-cadherin表達而實現(xiàn)的。本研究通過檢測HK-2細胞在IL-18刺激下其E-cadherin表達是否變化，并通過觀察核因子(NF)-kB特異性抑制劑SN50對HK-2細胞E-cadherin表達的影響來探討其可能的細胞內(nèi)通路機制，以期在我們原有研究的

3、基礎(chǔ)上，在進一步明確IL-18在慢性腎臟疾病(chronic renal kidney，CKD)發(fā)生、發(fā)展中的作用機制。 【方法】 應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)HK-2細胞。采用不同濃度的IL-18及一定濃度的核因子(NF)-kB特異性抑制劑SN50(一種能抑制NF-kB復(fù)合體核轉(zhuǎn)位的可透過細胞膜的特異性多肽)作用于HK一2細胞。在不同的時間段，運用免疫細胞化學法(ICC)檢測HK-2細胞E-cadherin的表達；采用逆轉(zhuǎn)錄-

4、聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測HK-2細胞E-cadherin mRNA的表達。 【結(jié)果】 1．IL-18減少E-cadherin陽性的HK-2細胞百分數(shù)0(對照)、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細胞24h、48h和72h后，ICC檢測不同濃度的IL-18作用于HK-2細胞24h、48h和72h后，E-cadherin陽性的HK-2細胞百分數(shù)有明顯的統(tǒng)計學差異。IL-18劑量和時間依賴性地減少E

5、-cadherin的表達。 2．IL-18減少HK-2細胞E-cadherin mRNA的表達 0(對照)、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細胞24h、48h和72h后，RT-PCR檢測其對HK-2細胞表達E-cadherin mRNA的影響，結(jié)果示IL-18劑量和時間依賴性地減少E-cadherin mRNA的表達。 3．NF-kB特異性抑制劑SN50可以部分阻斷IL-18對HK-2細胞E-cadh