50Hz工頻磁場暴露對FL細胞神經酰胺代謝及相關信號通路的影響.pdf

1、目的:研究50 Hz、0.4 mT工頻磁場暴露對人羊膜細胞（FL細胞）神經酰胺代謝及相關信號通路的影響。
　　方法:FL細胞接種于60 mm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)24 h，經50 Hz、0.4 mT磁場持續(xù)暴露60 min后提取細胞脂類，運用高效液相色譜串聯質譜法(HPLC-MS/MS)檢測分析細胞內鞘磷脂(SM)、二氫鞘氨醇、鞘氨醇和鞘氨醇1-磷酸(S1P)的含量;使用酸性鞘磷脂酶（A-SMase）抑制劑丙咪嗪（imipramine）預處

2、理細胞，再檢測分析工頻磁場暴露后細胞內SM的含量;利用Cathepsin D活性檢測試劑盒分析工頻磁場暴露后FL細胞內Cathepsin D的活性;采用western blot技術分析工頻磁場暴露60min后細胞內PP2AcY307位點的磷酸化水平;采用western blot技術分析工頻磁場暴露60 min后細胞內ERK1/2的磷酸化水平，再用鞘氨醇激酶（SphK）抑制劑SKⅠⅡ預處理細胞，分析工頻磁場暴露后細胞內S1P與ERK1/2

3、磷酸化之間的關系;采用CCK-8試劑盒檢測工頻磁場暴露60 min，再分別經0h，3h，6h，12h，24 h，36 h培養(yǎng)后細胞的增殖情況;使用ERK激酶(MEK1/2)抑制劑U0126預處理細胞，再分析工頻磁場暴露對FL細胞增殖的影響，探究工頻磁場暴露條件下ERK1/2磷酸化與細胞增殖之間的關系;最后使用SphK抑制劑SKⅠⅡ預處理細胞，驗證工頻磁場暴露條件下S1P與細胞增殖之間的關系;
　　結果:研究結果表明，暴露于50 H

4、z、0.4 mT磁場60 min后，FL細胞內SM含量下降，與假輻照組相比，C24-SM組、C24:1-SM組和C16-SM組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;而丙咪嗪預處理能夠有效抑制工頻磁場暴露誘導的SM含量的下降。工頻磁場暴露可誘導FL細胞內二氫鞘氨醇含量的增加(P＜0.05)。然而，工頻磁場暴露不影響FL細胞內CathepsinD的活性和PP2Ac307位點的磷酸化水平（活化）。工頻磁場暴露60 min后，FL細胞內ERK1/

5、2磷酸化水平增高，與假輻照組相比，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而SKⅠⅡ預處理細胞能夠有效抑制工頻磁場暴露誘導的胞內ERK1/2磷酸化(P＜0.05)。FL細胞經工頻磁場暴露60 min并經不同時間(0h，3h，6h，12h，24 h，36h)培養(yǎng)后，細胞增殖活動增強，與假輻照組相比，24 h培養(yǎng)組（P＜0.01）和36h培養(yǎng)組(P＜0.05)差異具有統(tǒng)計學意義，而且MEK1/2抑制劑U0126和SphK抑制劑SKⅠⅡ分別預處