PUMA在胃癌中的表達和作用機制研究.pdf

1、胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率位居第二。胃癌的發(fā)病機制主要包括原癌基因的異常激活以及抑癌基因(TSGs)的失活。除突變等遺傳學異常外，表觀遺傳學調控異常，如組蛋白修飾異常、啟動子甲基化等，也能導致腫瘤抑癌基因在轉錄后失活。
　　在癌癥發(fā)展過程中，組蛋白去乙?；軌驅е乱职┗虻霓D錄被沉默，這一過程需要組蛋白去乙酰酶（HDACs）的參與，然而有趣的是，許多被沉默的抑癌基因都能夠被組蛋白去乙酰酶抑制劑(HDACis)復活。基

2、于這一特點，組蛋白去乙酰酶抑制劑有望成為一種新的腫瘤治療策略。曲古菌素A(TSA)是組蛋白去乙酰酶的選擇性抑制劑，被廣泛用于復活抑癌基因的表達。通過比較TSA處理前后基因表達譜的變化我們發(fā)現(xiàn)，TSA處理后，PUMA基因表達水平出現(xiàn)了明顯的上調。
　　PUMA基因最初作為P53基因誘導凋亡中的一種重要介質而被人們熟知，在P53依賴性與非P53依賴性凋亡中均扮演著非常重要的角色。PUMA也是一種抑癌基因，在藥物誘導惡性腫瘤細胞凋亡中起

3、重要作用，然而該基因在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起怎樣的作用，迄今為止，我們知之尚少。
　　本研究中，我們旨在了解PUMA基因在胃癌中的表達情況，并進一步探究該基因與胃癌臨床病理參數(shù)的關聯(lián)性及其對胃癌生物學行為的影響。
　　材料和方法:
　　1.挑選人類正常胃粘膜上皮細胞株GES-1以及六個胃癌細胞株(AGS、SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823、NCI-N87)。使用實時定量RT-PCR檢測不同細胞株中PUMA

4、 mRNA的表達水平。
　　2.用Western Blotting方法檢測上述七種細胞株中PUMA蛋白表達水平。
　　3.收集24例胃癌組織標本，使用實時定量RT-PCR檢測胃癌組織與癌旁正常組織中PUMA mRNA表達水平。
　　4.通過搜索www.oncomine.org數(shù)據(jù)庫，應用Mann-Whitney test、Logrank test、Cox's regression model等統(tǒng)計學方法分析PUMA基因

5、與胃癌臨床特征的關聯(lián)性。
　　5.應用攜帶有PUMA基因的質粒轉染MKN28和SGC7901這兩種胃癌細胞株，然后通過MTS法及流式細胞術分析PUMA基因表達增加對胃癌細胞增殖能力及凋亡的影響
　　6.應用SiRNA敲減GES-1胃癌細胞中PUMA基因的表達，并通過MTS法檢測分析PUMA基因表達減少對胃癌細胞增殖能力的影響。
　　結果:
　　1.與正常胃粘膜上皮細胞株相比，在大多數(shù)胃癌細胞株中，PUMA基因無論

6、在mRNA還是在蛋白質水平均表現(xiàn)為明顯的表達下調;此外，與癌旁正常組織相比，胃癌組織中PUMA mRNA表達水平也表現(xiàn)為顯著下降(P＜0.05)。
　　2.PUMA mRNA的表達水平與胃癌臨床分期、HP感染、Lauren分型這三個因素無明顯相關性;然而，與生存期超過3年的患者相比，生存期低于3年的患者，其PUMA mRNA表達水平明顯下降;雖然應用Logrank test生存曲線分析未發(fā)現(xiàn)PUMA mRNA表達水平與總生存具有顯