碳酸酐酶IV在胃癌發(fā)生中的作用機制研究.pdf

1、一、目的：
　　胃癌是全球死亡率極高的惡性腫瘤之一，而我國正是胃癌高發(fā)地區(qū)。由于作用因素復雜，胃癌的發(fā)病機制仍不十分明了。目前已有研究表明碳酸酐酶家族(carbonic anhydrases，CAs)在人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著非常重要的角色，其中碳酸酐酶IV(carbonic anhydrase IV，CA4)在腸癌中就是通過靶向WTAP–WT1–TBL1抑制Wnt通路而發(fā)揮抑癌效應。鑒于此，本論文以胃癌作為研究對象，收集臨床樣

2、本并采用多種生物學實驗技術，希望闡明CA4在胃癌發(fā)生中所發(fā)揮的生物學功能，為胃癌的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù)。
　　二、方法：
　　1.采用實時定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（real-time reverse transcription-PCR，qRT-PCR）和蛋白免疫印跡技術（Western blot，WB）檢測CA4是否在胃癌及癌旁組織和胃正常細胞株GES-1及癌細胞株AGS中是否存在差異性表達。
　　2.采用焦磷酸測

3、序技術檢測GES-1和AGS中CA4基因甲基化狀態(tài)。
　　3.構建CA4過表達質粒，轉染至GES-1和AGS細胞中，然后分別采用流式細胞儀（flow cytometer）、實時細胞分析儀（Real-Time Cell Analyzer，RTCA）和細胞克隆形成實驗檢測細胞周期和增殖的變化。
　　4.上調 CA4在 GES-1和 AGS細胞中的表達后，應用 WB檢測細胞周期相關蛋白CDK2表達水平。
　　三、結果：

4、>　　1.相對于癌旁組織和胃正常粘膜細胞株 GES-1，胃癌癌組織標本和癌細胞株AGS均呈低表達。
　　2. AGS細胞CA4基因CpG島甲基化率高于GES-1。
　　3.上調CA4在GES-1和AGS細胞中的表達即可抑制細胞增殖也可阻滯細胞周期。
　　4.過表達CA4可以抑制GES-1和AGS細胞中CDK2的表達。
　　四、結論：
　　本實驗結果證實，與胃癌癌旁組織和正常胃粘膜細胞相比，胃癌癌組織和癌細胞