腺病毒介導的ING4及IL-24基因對人腦膠質瘤細胞抑制生長和侵襲遷移及其機制的實驗研究.pdf

1、研究目的:
　　 通過在人腦膠質瘤細胞中過表達ING4及IL-24基因,觀察人腦膠質瘤細胞的增殖及遷移變化,并進一步探討影響其增殖及遷移變化的機制。
　　 研究方法:
　　 (1)用Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染人腦膠質瘤細胞U251,通過熒光顯微鏡觀察腺病毒的感染效率,并通過RT-PCR法檢測ING4及IL-24的轉錄水平。
　　 (2)MTT法、流式細胞儀檢測ING4及IL-24對

2、U251細胞增殖的影響。
　　 (3)通過單層創(chuàng)傷模型、Boyden Chamber試驗來檢測ING4和IL-24對U251細胞的侵襲及遷移影響。
　　 (4)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染U251后,通過免疫印跡方法檢測抑癌基因NGF、TrkA的表達水平,并分析其影響U251細胞增殖的可能機制。
　　 (5)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體感染U251后,通過pull-down

3、 assay檢測活性RhoA表達,并分析其影響U251細胞的侵襲及遷移的可能機制。
　　 研究結果:
　　 (1)Ad-ING4,Ad.IL-24及腺病毒空載體轉染U251后,熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(GFP蛋白),發(fā)現(xiàn)腺病毒的感染效率可達95％,RT-PCR結果顯示Ad-ING4組及Ad.IL-24組出現(xiàn)高表達電泳條帶,而腺病毒空載體組則未出現(xiàn)電泳條帶,表明Ad-ING4,Ad.IL-24基因均轉染U251細胞成功。

4、
　　 (2)MTT結果顯示Ad-ING4及Ad.IL-24明顯抑制了U251細胞的增殖,且流式細胞儀細胞周期檢測發(fā)現(xiàn)Ad-ING4處理組較對照組S期明顯縮短,Ad.IL-24處理組較對照組G2/M期明顯延長,表明Ad-ING4及Ad.IL-24均明顯抑制了U251細胞的增殖。
　　 (3)通過單層創(chuàng)傷模型、Boydcn Chamber試驗顯示ING4和IL-24均能明顯抑制U251細胞的侵襲及遷移。
　　 (4

5、)免疫印跡結果顯示過表達ING4,IL-24的U251細胞中NGF及TrkA表達降低。
　　 (5)pull-down aussay檢測發(fā)現(xiàn)Ad-ING4及Ad.IL-24處理組較對照組均明顯降低活性RhoA的表達。
　　 結論：
　　 Ad-ING4及Ad.IL-24可以抑制U251細胞的增殖及遷移,并且發(fā)現(xiàn)過表達ING4,IL-24基因抑制了U251細胞中癌基因NGF及TrkA的表達,且降低了RhoA的活性,