神經降壓素受體1在先天性巨結腸癥腸壁肌間神經叢的表達及意義.pdf

1、目的:先天性巨結腸癥（HSCR）又稱“腸壁無神經節(jié)細胞癥”，是由遺傳、環(huán)境等多種因素共同作用導致腸神經系統(tǒng)(ENS)早期發(fā)生多基因突變或表達異常的神經嵴細胞源性的一種先天性腸道疾病。其基本病理生理改變?yōu)檫h端病變結腸黏膜下神經叢（Submucosal plexuses）和肌間神經叢（Myenteric plexuses）內完全或部分缺乏腸神經節(jié)細胞(IGCS)，致使神經纖維排列紊亂，呈波浪狀，造成結腸持續(xù)痙攣，失去正常的推進蠕動功能。由于

2、糞便通過困難，長期淤積于痙攣腸段，近端結腸代償性擴張、增厚，形成巨結腸。ENS是一個復雜而積極的胃腸道動力和感覺神經系統(tǒng)，由腸道肌間和黏膜下神經叢共同構成，兩者之間緊密聯(lián)系，對胃腸道的運動、分泌功能具有獨立的調節(jié)作用。HSCR是ENS早期發(fā)生基因突變或功能喪失的結果。
　　神經降壓素（NT）是由腸道具有特殊內分泌功能的開放型的N細胞分泌的一種神經遞質或調質，屬于配體依賴性的轉錄因子，在中樞神經系統(tǒng)（CNS）以及心血管、呼吸、消化、

3、內分泌、免疫等多種外周系統(tǒng)中存在并發(fā)揮重要的功能調節(jié)作用。神經降壓素受體1（NTSR1）是一種具有7個跨膜結構域的G蛋白偶聯(lián)受體，在人體結腸中與NT配基親和力最高。NT通過介導G蛋白偶聯(lián)受體NTSR1激活相應的信號通路，產生向下的信號傳遞，到達胃腸道平滑肌等效應部位，從而增強結腸的推進運動，使糞便排空。NTSR1在ENS中對腸道動力具有十分重要的作用。
　　在前期研究中，利用基因芯片技術檢測出大量的HSCR差異性表達基因，其中NT

4、SR1基因表達明顯下調，并經RT-PCR驗證。查閱相關文獻，目前國內外在NT-NTSR1的相互作用與HSCR發(fā)病的相關關系方面研究較少。有研究已發(fā)現(xiàn)，NTSR1在人體正常結腸組織黏膜下和肌間神經叢存在不同程度的陽性表達，而NTSR1在HSCR各腸段是否表達并存在表達的異常尚不清楚。因此，本研究從前期研究結果中選取 NTSR1基因，采用免疫組織化學染色法觀察NTSR1在HSCR各段腸壁肌間神經叢的表達情況，從而初步探討NTSR1與HSCR

5、發(fā)病的可能關系。
　　方法:選取2010年1月至2014年9月在廣東省婦幼保健院小兒外科經肛門巨結腸根治術治療的HSCR患兒手術標本42例作為實驗組，實驗組分為狹窄段、移行段、擴張段、正常段四個組別。所有患兒均為首次接受手術治療，均為散發(fā)病例，無合并其他主要臟器的先天性畸形或綜合癥，近系親屬均無HSCR病例。所有患兒均根據(jù)術前臨床表現(xiàn)、鋇劑灌腸造影等檢查，以及術中快速冰凍病理及術后病理科醫(yī)師二次HE染色診斷結果綜合確診。所選取病例

6、符合正態(tài)分布的原則。選取與實驗組年齡相近的如先天性無肛門、結腸穿孔、乙狀結腸冗長癥等非HSCR患兒手術切除的正常結腸標本20例作為對照組，對照組家族中無HSCR病例及其它腸神經發(fā)育異常性疾病。在光學顯微鏡下觀察實驗組與對照組病例HE染色的結果并統(tǒng)計。應用免疫組織化學染色法檢測42例實驗組標本狹窄段、移行段、擴張段、正常段及20例正常對照組標本腸壁肌間神經叢中NTSR1的表達，光鏡下觀察并統(tǒng)計其陽性表達情況，并與HE染色結果進行對比。同時

7、應用計算機圖像分析軟件(Image-Pro Plus6.0)計算NTSR1在實驗組及對照組各段腸壁肌間神經叢中免疫組化陽性染色的平均光密度（MOD）并將結果進行定量分析，將所得數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理分析，判定差別是否存在意義。
　　結果:
　　1. HE染色：狹窄段肌間神經叢中未見神經節(jié)細胞，神經纖維較擴張段明顯增粗、排列紊亂。從狹窄段到正常段腸壁肌間神經叢中，神經節(jié)細胞的分布逐漸增多，變性神經纖維的分布逐漸

8、減少。
　　2.在HSCR實驗組正常段及對照組肌間神經叢中，可見NTSR1強陽性表達的神經纖維；在擴張段，強陽性表達的神經纖維較實驗組正常段和對照組有所減少；在移行段，可見散在弱陽性到中等強度陽性表達的神經纖維；在狹窄段，可見少量弱陽性表達的神經纖維，肌間神經叢總體表達呈弱陽性或陰性。
　　3. NTSR1在HSCR各段腸壁平滑肌中呈弱陽性到中等強度陽性表達，其中環(huán)形肌的總體表達強度高于縱形肌。
　　4.定量分析：NT

9、SR1在HSCR實驗組狹窄段、移行段、擴張段、正常段及對照組肌間神經叢中陽性表達的平均光密度分別為8.39±2.68、11.76±6.79、17.14±12.26、21.92±14.68、23.45±19.82，經統(tǒng)計軟件分析，與移行段、擴張段、正常段及對照組腸壁肌間神經叢相比，狹窄段平均光密度明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義；移行段與擴張段、移行段與正常段、移行段與對照組、擴張段與正常段、擴張段與對照組、正常段與對照組各間的平均光密度相比，