北京油雞不同組織和不同體重個體基因組DNA甲基化分析.pdf

1、在真核生物中，DNA甲基化是表觀遺傳學重要的修飾方式之一，對基因的表達具有調控作用，研究表明:DNA甲基化在動物生長和組織發(fā)育分化中具有重要作用。本研究以17周齡北京油雞肌肉和卵巢組織為實驗材料，應用甲基化敏感擴增片段多態(tài)性（Methylation sensitive amplified polymorphism，MSAP）方法檢測2個組織基因組DNA甲基化程度，通過毛細管電泳結果優(yōu)化了實驗條件，開發(fā)了MSAP熒光檢測數據的自動分析軟件

2、，對北京油雞肌肉和卵巢組織及不同體重組間基因組DNA甲基化水平差異進行研究。結果如下:
　　1、米用毛細管電泳熒光檢測技術分析MSAP選擇性擴增產物，通過對基因組DNA用量、預擴增產物稀釋倍數、選擇性引物濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、電泳DNA量、內標量和進樣時間等8個主要參數進行分析和優(yōu)化，優(yōu)化了用于北京油雞基因組DNA甲基化分析的MSAP毛細管電泳熒光檢測體系。
　　2、應用MSAP方法檢測北京油雞肌肉組織基因組D

3、NA甲基化水平。對獲得的MSAP熒光檢測初始數據分別應用直接取整法、整區(qū)間放置法和半區(qū)間放置法等三種自動處理方法進行分析并比較。結果顯示:整區(qū)間放置法和半區(qū)間放置法比直接取整法更適用于MSAP熒光檢測初始數據的分析，建立了基于半區(qū)間放置法分析原理的可在線分析MSAP熒光檢測初始數據的軟件—MSAP Analyst。
　　3、應用MSAP方法檢測北京油雞肌肉和卵巢組織的基因組DNA甲基化狀態(tài)。12對選擇性擴增引物共產生53027條清

4、晰的擴增條帶，平均每個個體每對引物組合可獲得150個條帶。在檢測的個體中，肌肉組織的甲基化水平為54.04％，卵巢組織為57.06％，2種組織的甲基化水平差異顯著(P＜0.05)，肌肉和卵巢組織基因組DNA甲基化差異主要存在于全甲基化位點中。分離鑒定了5個可能與組織分化相關的特異性甲基化片段，除1個位于3'下游，其余均位于內含子中。
　　4、應用MSAP方法檢測高低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化狀態(tài)。12對選擇性擴增引物

5、共產生50776條清晰的擴增條帶，高體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平為53.70％，低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平為55.86％，方差分析結果顯示:高低體重組北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平差異顯著(P＜0.05)，體重因素與性別因素之間無互作效應。Pearson等級相關分析顯示:北京油雞肌肉組織基因組DNA甲基化水平與體重之間存在顯著負相關(P＜0.05)。分離鑒定了14個可能與體重有關的特異性甲基化