Ezrin在星形細胞瘤的表達意義及黃芩素對SHG-44細胞ezrin表達、增殖和活動的影響.pdf

1、第一章 Fzrin在人腦星形細胞瘤的表達意義 目的：探討膜-細胞骨架聯(lián)接蛋白埃茲蛋白(Ezrin)在人腦星形細胞瘤中的表達及意義。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC方法，檢測107例人腦星形細胞瘤和10例正常腦組織中Ezrin的表達，并結(jié)合臨床隨訪資料分析表達水平與星形細胞瘤臨床預(yù)后的相關(guān)性。 結(jié)果：Ezrin的表達在人腦星形細胞瘤組和對照組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在107例的星形細胞瘤組織中發(fā)現(xiàn)9

2、6例Ezrin陽性表達，陽性表達率為89.7％，Ezrin表達與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)(r=0.551，P<0。01)，結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)Ezrin的表達水平和腫瘤細胞分化、瘤周水腫程度具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Ezrin強陽性表達組和弱陽性+陰性表達組的術(shù)后無瘤生存時間之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=29.85，P=0.000)。 結(jié)論：Ezrin的表達水平與人腦星形細胞瘤的惡性程度密切相關(guān)，Ezrin的過度表達對星形

3、細胞瘤發(fā)展起重要作用，提示Ezrin可以作為反映星形細胞瘤預(yù)后的一種有價值的分子標志物。 第二章黃芩素對SHG-44細胞增殖、侵襲遷移的影響 目的：觀察黃芩素干預(yù)人星形細胞瘤SHG-44細胞株后，腫瘤細胞周期、增殖以及運動侵襲能力的變化。 方法：以體外培養(yǎng)的人星形細胞瘤SHG-44細胞為研究對象，用黃芩素干預(yù)后，顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，MTT法觀察細胞增殖，流式細胞儀(FCM)分析細胞周期，侵襲小室實驗觀察細胞侵

4、襲力改變，蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測細胞MMP2、MMP9、survivin、cyclinD蛋白表達的變化。 結(jié)果：1、MTT法觀察黃芩素對SHG-44細胞增殖的抑制作用隨時間的延長和藥物濃度的增加，抑制作用逐漸增強，有明顯的時間和劑量依賴性；2、流式細胞儀檢測顯示隨黃芩素濃度增加，凋亡率增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；黃芩素將腫瘤細胞阻滯于G0/G1期，與對照組比較S期細胞減少近18％，差異有統(tǒng)計學(xué)意

5、義(P<0.05)；3、侵襲小室實驗證實隨著黃芩素干預(yù)濃度增加，SHG-44細胞48h后穿過人工基底膜的細胞數(shù)量明顯更少，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；4、黃芩素呈濃度依賴性地抑制SHG-44細胞MMP2、MMP9及survival、cyclinD蛋白的表達。 結(jié)論：1.黃芩素對SHG-44細胞增殖的抑制作用呈時間和劑量依賴性；2.48h黃芩素抑制SHG44細胞增殖的IC50為13.77μM；3.黃芩素抑制SHG

6、44細胞侵襲遷移；4.黃芩素對星形細胞瘤治療具有潛在應(yīng)用價值。 第三章黃芩素對SHG-44細胞Ezrin的表達和運動的影響 目的：比較siRNA下調(diào)Ezrin在人腦星形細胞瘤SHG-44細胞中的表達，與黃芩素干預(yù)后，腫瘤細胞運動能力的變化，探討黃芩素是否通過抑制Ezrin蛋白表達及活化實現(xiàn)抗腫瘤的機制。 方法：以體外培養(yǎng)的人星形細胞瘤SHG-44細胞為研究對象，黃芩素干預(yù)后，蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot

7、)檢測細胞Ezrin、磷酸化Ezrin表達的變化，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測細胞Ezrin mRNA表達量。進一步運用siRNA技術(shù)下調(diào)Ezrin細胞中的表達，劃痕愈合實驗和掃描電鏡觀察細胞運動和形態(tài)在干擾前后與黃芩素干預(yù)后變化。 結(jié)果：黃芩素呈濃度依賴性地抑制Ezrin，磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在SHG-44細胞中的表達，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。siRNA下調(diào)Ezrin在SHG