EGF對(duì)Ezrin在SKOV3細(xì)胞中表達(dá)的影響及Ezrin和EGFR在人卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)分析.pdf

1、目的： 探討在EGF和gerlistein作用下人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖及Ezrin表達(dá)的情況，分析EGFR及Ezrin在人卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)意義及與預(yù)后的關(guān)系。 材料和方法： 1、采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，用MT3、法比較不同濃度的EGF及genistein作用下，人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3的生長(zhǎng)、增殖變化；間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)在EGF作用下Ezrin在SKOV3細(xì)胞的分布；半定量RT-PCR檢測(cè)SKOV3細(xì)

2、胞在不同濃度的EGF及genistein作用下Ezrin表達(dá)的變化。 2、選取1993年1月至2005年5月本教研室有堅(jiān)持隨訪資料的卵巢上皮性腫瘤93例，其中良性11例、交界性9例、惡性70例，并隨機(jī)選取正常卵巢組織7例，制作組織芯片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Ezrin及EGFR的表達(dá)。 結(jié)果： 1、在較低濃度的EGF(0.1，lng/ml)作用下，SKOV3細(xì)胞增殖率呈增加趨勢(shì)并與EGF濃度正相關(guān)(p<0.00

3、01)；在較高濃度的EGF(10，100rlg/ml)作用下，細(xì)胞增殖率與EGF濃度無關(guān)(p>0.05)；隨EGF'作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖率增加(p<0.05)。在genistein作用下，SKOV3細(xì)胞存活率隨濃度的增加呈下降趨勢(shì)，并與genistein濃度負(fù)相關(guān)(p<0.0001)；相同濃度下，隨getIistein作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率增加(p<0.05)。EGF與gerlistein同時(shí)作用于SKOV3細(xì)胞與單獨(dú)應(yīng)用gen

4、istein相比，細(xì)胞存活率增加(p<0.05)。 2、間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)顯示，Ezrin在SKOV3細(xì)胞中分布于胞漿及胞膜，在EGF作用下SKOV3細(xì)胞伸出偽足，胞體伸長(zhǎng)，Ezrin向胞膜移位、聚集。 3、半定量PT-PCR結(jié)果顯示，在較低濃度(0.01、lng/ml)時(shí)，EGF濃度與EzrinmRNA表達(dá)正相關(guān)(p<0.05)。EGF與genistein同時(shí)作用組與getlistein單獨(dú)作用組相比，Ezrin m

5、RNA表達(dá)增加(p<0.05)。 4、EGFR表達(dá)的陽性率及RS評(píng)分從正常卵巢組織、良性卵巢上皮性腫瘤、交界性卵巢上皮腫瘤到卵巢癌呈上升趨勢(shì)。正常卵巢與良性卵巢上皮腫瘤、交界性卵巢上皮腫瘤、卵巢癌之間的表達(dá)均存在顯著差異(p<0.05)。EGFR的表達(dá)與EGF對(duì)Ezrin在SKOV3細(xì)胞中表達(dá)的影響及Ezrin和EGFR在人卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)分析手術(shù)分期及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(p<0.05)，但與年齡、組織學(xué)分級(jí)及有無淋巴結(jié)

6、轉(zhuǎn)移無關(guān)。在單因素及Cox多因素生存分析中顯示，EGFR的表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤病人的累積生存率有關(guān)，EGFR陰性病人相對(duì)危險(xiǎn)度比EGFR陽性病人低(多因素Cox，p<0.05)，預(yù)后好。 5、Ezrin表達(dá)的陽性率及RS評(píng)分從正常卵巢組織、良性卵巢上皮性腫瘤、交界性卵巢上皮腫瘤到卵巢癌呈遞減趨勢(shì)，在良性卵巢上皮性腫瘤與卵巢癌中的表達(dá)存在顯著差異(p<0.05)。Ezrin的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、手術(shù)分期呈負(fù)相關(guān)(p<0.05)。在E

7、zrin表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤患者的生存分析顯示，Ezrin的表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤病人的累積生存率有關(guān)(p<0.05)。Ezrin表達(dá)陰性病人累積生存率比Ezrin表達(dá)陽性病人低，預(yù)后差。但在COX多因素生存分析中，Ezrin表達(dá)強(qiáng)度對(duì)卵巢上皮性腫瘤病人的生存無獨(dú)立的影響。 6、相關(guān)分析顯示，Ezrin的表達(dá)與EGFR無明顯的相關(guān)性(p>0.05)。 結(jié)論： 1、體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法研究表明，EGF能促進(jìn)人卵巢癌SK

8、OV3細(xì)胞的增殖，上調(diào)SKOV3細(xì)胞中Ezrin的表達(dá)。getlistein能拮抗這種作用。EGF能影響Ezrin在SKOV3細(xì)胞中分布。 2、EGFR可能是卵巢上皮腫瘤發(fā)生的相關(guān)基因，其表達(dá)與腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。EGFR陽性病人預(yù)后較差，EGFR可作為卵巢上皮性腫瘤預(yù)后不良的指標(biāo)。 3、本研究佐證了Ezrin參與卵巢上皮性腫瘤轉(zhuǎn)移。但Kaplan-Meier法及COX單因素生存分析顯示，卵巢上皮性腫瘤中Ezrin表達(dá)