MicroRNAs在瘢痕疙瘩中差異表達的研究.pdf

1、[目的]
　　 瘢痕疙瘩的形成受多種基因、細胞因子的調控，然而目前對這些基因、細胞因子的調控表達機制的研究尚不明確；microRNAs是一類內源性染色體上非編碼蛋白的RNA，能在轉錄后水平調控基因的表達，與個體發(fā)育、干細胞分化和疾病發(fā)生密切相關。研究通過檢測人正常皮膚組織和人瘢痕疙瘩組織中microRNAs的表達情況，初步篩選人瘢痕疙瘩microRNAs表達譜。通過本研究，希望為研究microRNAs在瘢痕疙瘩發(fā)病機制中的作用提

2、供實驗依據，為瘢痕疙瘩的治療提供新的分子靶點。
　　 [方法]
　　 根據瘢痕疙瘩臨床診斷標準及實驗要求制定瘢痕疙瘩、正常皮膚病例納入標準和排除標準，以此標準收集瘢痕疙瘩標本(6例)和正常皮膚標本(5例)；TRIZOL法提取標本的總RNAs并進行質檢，再采用Ambion’s miRNA Isolation Kit從總RNAs中分離microRNAs；熒光標記后與微陣列芯片雜交，掃描檢測后數據經SAM和Cluster分析處

3、理，采用median center、hierarchical和average linkage法得到聚類分析圖，篩選瘢痕疙瘩組織中microRNA差異表達譜。采用實時熒光定量RT-PCR技術驗證在所有瘢痕疙瘩組織中均存在差異表達的microRNAs。
　　 [結果]
　　 與正常皮膚組織相比，有263個microRNA在瘢痕疙瘩組織中的表達發(fā)生了顯著變化，其中171個表達上調(Fold Change≥1.50)，92個表達

4、下調(Fold Change≤0.67)。Cluster3.0軟件對差異microRNAs進行聚類分析，結合兩樣本均數t檢驗(P<0.05)統(tǒng)計分析差異表達microRNAs，篩選出12個在所有瘢痕疙瘩標本組織中均存在差異表達的microRNAs，其中hsa-miR-1290表達上調，11個下調表達為：hsa-miR-1204、hsa-miRPlus-F1158、hsa-miR-934、hsa-miR-186*、hsa-miR-99b*

5、、hsa-miR-605、hsa-miR-645、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-224*、hsa-miR-551b*、hsa-miRPlus-C1110。采用實時熒光定PCR(qRT-PCR)方法進行差異表達的miRNAs的驗證，結果與芯片篩選miRNAs表達結果相一致。
　　 [結論]
　　 本研究通過microRNA微陣列芯片篩選得到人瘢痕疙瘩microRNAs差異表達譜，其可能參與瘢痕疙瘩的發(fā)生發(fā)展