瘢痕疙瘩miRNA表達譜的篩選及miR-199A-5p對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖功能的影響.pdf

1、目的:
　　隨著細胞生物學和分子生物學的發(fā)展，許多研究表明瘢痕疙瘩的形成可能與基因的結構、功能或表達異常有關，但具體的調控機制尚不明確。miRNA是真核細胞中一類長度約為22個核苷酸的參與基因轉錄后水平調控的非編碼小分子RNA。它參與了細胞增殖、分化、凋亡、免疫反應等一系列重要生物進程的調節(jié)，與多種疾病的發(fā)生密切相關。本研究旨在篩選出瘢痕疙瘩相關miRNAs，初步構建瘢痕疙瘩miRNA差異表達譜，并檢測miRNA對瘢痕疙瘩成纖維細

2、胞增殖的影響，為瘢痕疙瘩在miRNA分子水平的研究提供實驗依據(jù)，從而指導瘢痕疙瘩的有效治療。
　　方法:
　　收集手術切除瘢痕疙瘩組織（8例）及正常皮膚組織（8例）標本，采用miRNA基因芯片（Exiqon公司）技術檢測瘢痕疙瘩與正常皮膚組織差異表達的miRNA基因，選擇顯著差異表達的目的miRNA: miR-199a-5p，運用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)驗證其表達，并于瘢痕疙瘩成纖維細胞株中轉染miR-199a-

3、5p模擬物(miR-199a-5p mimics)，模擬細胞中成熟miR-199a-5p的高表達，使用EdU檢測方法檢測其對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖功能的影響。
　　結果:
　　1.通過芯片檢測及聚類分析，共發(fā)現(xiàn)17個明顯與正常皮膚組織表達差異的miRNAs: hsa-miR-516b、hsa-miRPlus-E1106、hsa-miRPlus-E1247表達上調;hsa-miR-214、hsa-miR-645、hsa-miR

4、-338-5p、hsa-miR-934、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-21*、hsa-miR-122*、hsa-miR-186*、hsa-miR-495、hsa-miR-412、hsa-miR-551b*、hsa-miRPlus-F1158、hsa-miRPlus-E1038、hsa-miR-1038表達下調。
　　2.qRT-PCR驗證結果顯示miR-199a-5p表達下調，與芯片檢測結果相一致。
　　3

5、.EdU檢測結果顯示:與NC轉染組相比，miR-199a-5p mimics轉染組瘢痕疙瘩成纖維細胞的增殖率下降，細胞的生長周期分布發(fā)生改變，S期及G2/M期比例增加，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1.瘢痕疙瘩中miRNA的差異表達有組織特異性:與正常皮膚組織相比，瘢痕疙瘩組織中共168個miRNA表達上調，125個miRNA下調表達。綜合應用聚類及統(tǒng)計學分析，結果顯示明顯上調的miRNA3個，下調的為14個。