ALA-PDT對瘢痕疙瘩成纖維細胞周期影響及調(diào)控機制的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩68頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:探討5-氨基酮戊酸(5-aminolevulnilic acid,ALA)光動力療法(photodynamic therapy,PDT)對瘢痕疙瘩成纖維細胞(keloid fibroblasts,KFB)周期影響及調(diào)控機制的研究。
  方法:
  1.采用組織塊培養(yǎng)方法,分別體外培養(yǎng)KFB和正常皮膚成纖維細胞(human skin fibroblasts,HSFs),觀察其生物學特征;應用抗波形蛋白抗體做免疫細胞化學鑒

2、定,證實為成纖維細胞(fibroblast,FB)。
  2.KFB傳代培養(yǎng)后,選用第3-5代對數(shù)生長期的KFB進行實驗,分別加入含有ALA0.25mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.0mmol/L、4.0mmol/L、8.0mmol/L的無血清高糖DMEM培養(yǎng)液,避光培養(yǎng)4h后,光動力儀照射,光源距離15cm,波長630nm,光照密度為100mW/cm2,光照時間分別為100s、200s、400s、800s

3、、1200s(即光照能量分別為10J/cm2、20J/cm2、40J/cm2、80J/cm2、120J/cm2)。繼續(xù)培養(yǎng)24h后,采用CCK8法檢測增殖活性,選出最優(yōu)光敏劑濃度+光照能量組合(ALA濃度為4.0mmol/L,PDT能量為80J/cm2)用于實驗。
  3.將傳代培養(yǎng)的生長情況良好的KFB分為4組,即空白對照組,ALA+PDT組(AP組),p79350(p38 MAPK信號通路激動劑)+ALA+PDT組(PAP組)

4、,SB203580(p38 MAPK信號通路阻斷劑劑)+ALA+PDT組(SB組);正常皮膚成纖維細胞組標記為HSFs組,以ALA濃度為4.0mmol/L,PDT能量為80J/cm2(最優(yōu)光敏劑濃度+光照能量組合)進行干預KFB各分組,流式細胞儀檢測各組FB細胞周期中細胞分布比例;Western Blot法檢測各組中細胞周期蛋白D1(CyclinD1)、磷酸化p38細胞絲裂原活化蛋白激酶(phospho-p38mitogen-activ

5、ated protein kinase,p-p38 MAPK)表達情況。
  結果:
  1.組織塊接種成功后約7天可見細胞形態(tài)呈長梭形或三角形,邊緣向外伸出數(shù)個突起;抗波形蛋白抗體免疫鑒定為陽性,證實其為成纖維細胞。
  2.CCK8檢測結果顯示:ALA-PDT干預后,KFB活性受到抑制,且在一定的范圍中,KFB的活性隨著ALA濃度、PDT能量的增大而降低。
  3.流式細胞儀檢測提示:五組細胞均以G0/G1期

6、細胞為主峰,空白對照組中細胞S期峰值高于HSFs組,S期細胞比例顯著增高(49.32+2.8%),PI具有統(tǒng)計學差異(P<0.05);AP組、PAP組、SB組中S期峰值均低于空白對照組,S期細胞比例顯著降低,分別為(20.26+2.5%、24.45+2.3%、16.97+2.6%),PI具有統(tǒng)計學差異(P<0.05);AP組中S期細胞峰值高于SB組(16.97+2.6%),低于PAP組(24.45+2.3%),PI具有統(tǒng)計學差異(P<0

7、.05)。
  4.Western Blot法檢測提示:空白對照組中Cyclin D1表達明顯高于HSFs,AP組、PAP組、SB組中Cyclin D1、p-p38MAPK表達顯著低于空白對照組,AP組中CyclinD1、p-p38MAPK表達高于SB組,低于PAP組,差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
  結論:
  1. p-p38 MAPK/Cyclin D1在KFB中的異常表達可導致成纖維細胞的異常增殖;<

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論