甘肅地區(qū)葡萄酒相關酵母菌的分離及其分類鑒定.pdf

1、葡萄酒釀造是一個復雜的微生物學過程，其中由酵母菌主導的酒精發(fā)酵是葡萄酒生產的重要階段之一。酵母菌的生物多樣性及微生物群體組成對葡萄酒的感觀質量具有重要影響。葡萄酒相關酵母菌的生物多樣性及分類鑒定是選育優(yōu)良釀酒酵母菌種的基礎和關鍵。 而我國葡萄釀酒微生物的生物多樣性研究尚未開始，葡萄酒相關酵母菌資源也被長期擱置。我國甘肅武威和高臺葡萄產區(qū)屬冷溫帶干旱區(qū)，正成為有競爭力的優(yōu)質葡萄酒產區(qū)，同時也是未開啟的葡萄酒相關酵母菌資源庫。本研究

2、以莫高葡萄酒廠和祁連葡萄酒廠設備表面、葡萄生產基地的葡萄漿果表面、土壤等為分離源分離葡萄酒相關酵母菌。使用WL營養(yǎng)培養(yǎng)基的形態(tài)分類、經典分類學方法、26S rDNA-RFLP分析、26S rDNAD1/D2區(qū)及5.8S-ITS區(qū)序列分析，對所分離的酵母菌進行分類鑒定，揭示此地區(qū)的葡萄酒相關酵母菌的生物多樣性。 一、利用WL營養(yǎng)培養(yǎng)基進行聚類分析，將采集于莫高酒廠的234株葡萄酒相關酵母菌分為10個培養(yǎng)類型，將采集于祁連酒廠的酵母

3、菌株166株分為7個培養(yǎng)類型，這說明兩地的酵母菌種類有較大的差異。 二、采用26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析和5.8S-ITS區(qū)序列分析，結果表明莫高酒廠的葡萄酒相關酵母菌分屬于Metsehnikowua pulcherrima(美極梅奇酵母)、Hanseniaspora uvarum(葡萄有孢漢遜酵母)、Issatchenkia orientalis(東方伊薩酵母)、Pichia fermentans(發(fā)酵型畢赤酵母)、

4、Pichia kluyveri var．kluweri(克魯維畢赤酵母)、Saccharomyces cereyisiae(釀酒酵母)、Cryptococcus magnus(大隱球酵母)、Cryptococcus uzbeldstanensis、 Rhodosporidium kratochvilovae(紅冬孢酵母屬)、Rhodotorula mucilaginosa等10個種；祁連酒廠的葡萄酒相關酵母菌分別為Saccharomyc

5、es cerevisiae(釀酒酵母)、Issatchenkia orientalis(東方伊薩酵母)、Pichia anomala、Rhodotorula mucilagrinosa(膠紅酵母)、 Cryptococcus magnus(大隱球酵母)、Cryptococcus flavescens(淺黃隱球酵母)、 Hanseniaspora uvarum(葡萄汁有孢漢遜酵母)等7個種。 三、莫高酒廠葡萄園土壤中的優(yōu)勢菌種為C

6、．magnus和R．mucilaginosa，設備表面以紅酵母和H．uvarum為優(yōu)勢菌種。祁連酒廠葡萄漿果表面的優(yōu)勢菌種為H. uvarum和 I．orientalis 。 四、莫高葡萄酒廠在所調查的4個自然發(fā)酵過程中，其菌群變化如下：自然發(fā)酵初期的葡萄酒相關酵母菌主要有M．pulcherrima、H．uvarum、Pichia kluveri var．kluvveri、I.orientalis，其中H.uvarum為啟動發(fā)酵

7、的主要菌種。自然發(fā)酵中期時H．uvarum比例較初期有所下降甚至不存在，而M．pulcherrima較初期有所增長，同時S．cerevisiae也開始生長。此后S．cerevisiae為發(fā)酵的主要動力，主導發(fā)酵直至結束。 五、26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析表明菌株C248-K與Pichia fermentans的同源性為98.8％，存在7個堿基的差異，菌株C84與Metschnikowia pulcherrima的同源性