白樺BpFLC基因的過量表達及RNAi遺傳轉化研究.pdf

1、FLC基因，是開花植物中的一個調節(jié)植物開花進程的關鍵基因，它是一個抑制開花基因，特別是在春化過程中起到關鍵作用。白樺中存在的FLC基因，即BpFLC基因。本文研究了白樺的FLC基因對白樺的生殖生長和營養(yǎng)生長的一些影響以及構建BpFLC-RNAi干擾表達載體轉入白樺后，再對轉入后的白樺的FLC表達量進行測定以及后續(xù)的研究。
　　通過熒光定量PCR的方法，檢測了BpFLC基因在白樺不同生長時期的表達量，檢測結果是:BpFLC基因在白樺

2、的不同生長時期中均有表達，但在5年生及多年生白樺苗中的表達量最低。檢測BpFLC基因在5年生白樺的一年里不同時間的表達量，發(fā)現(xiàn):BpFLC基因在一年中均有表達，但5月和6月的表達量最低。此外，對BpFLC基因過表達的白樺苗和野生型對照分別測量了移栽后4個月、6個月和8個月的株高，分析發(fā)現(xiàn):6號、8號和10號株系與野生型白樺株高差異顯著，且隨著白樺生長，6號和8號株高差異變得更加顯著。對BpFLC基因過表達的白樺苗和野生型對照分別測量了移

3、土后9個月的地徑，分析發(fā)現(xiàn)4號和9號株系與野生型差別顯著，10號極顯著。說明BpFLC基因的過量表達對白樺的株高及地徑有一定的影響。對休眠后的BpFLC基因過表達白樺與野生型白樺進行生長狀態(tài)進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn):BpFLC基因過表達白樺與野生型白樺的整體生長狀態(tài)差異不大，推測BpFLC基因的過量表達對白樺休眠后的總體生長狀態(tài)基本沒有影響，但4、8、10和11號株系經(jīng)歷休眠后，與野生型相比，較容易從基部長出新枝，且4和11號長出新枝數(shù)量較多。<

4、br>　　為了后期實驗造林，本文中對BpFLC基因過表達的白樺組培苗進行擴繁培養(yǎng)，從最初的組培苗切莖段長到愈傷、再從愈傷長成叢生苗、從叢生苗到生根苗，最后移到花盆土中，需要5到6個月的時間。目前已經(jīng)擴繁550到600株，用于后期實驗林的建設及研究。
　　構建了BpFLC-RNAi干擾表達載體，利用液氮凍融法轉入到EHA105農桿菌中，得到轉化子，并通過農桿菌介導法對白樺進行遺傳轉化，得到了5個株系。通過熒光定量PCR的方法，測得轉