大豆球蛋白、β—伴球蛋白的分離提取及對豬外周血淋巴細(xì)胞增殖和免疫功能的影響.pdf

1、本研究采用實(shí)驗(yàn)研究方法，以分離純化豆粕中的抗原蛋白作實(shí)驗(yàn)材料，研究純化抗原蛋白的特性和體外對體液免疫及細(xì)胞免疫的影響。研究分兩個實(shí)驗(yàn)： 實(shí)驗(yàn)一：大豆球蛋白和β-伴球蛋白分離提取。利用豆粕中7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之間溶解度不同的特點(diǎn)，首先對兩種球蛋白進(jìn)行初步分離，然后利用硫酸銨進(jìn)行鹽析和凝膠過濾，除去非抗原蛋白組分，得到純度相對較高的大豆球蛋白和β一伴球蛋白。 結(jié)果表明：豆粕粉經(jīng)0.03mMTris-HCI

2、、料液比1：20、室溫、PH8.0，提取2h，豆粕總蛋白提取率為32.88％?？煞蛛x出蛋白質(zhì)含量71.53％的llS粗組分9.1％和蛋白質(zhì)含量60.73％的7S粗組分7.9％；經(jīng)鹽析和凝膠過濾后，可得到蛋白含量84.19％的純化大豆球蛋白4.3％和蛋白含量79.47％的純化β-伴球蛋白6.0％；經(jīng)過SDS-PAGE電泳鑒定，11S粗組分純度達(dá)到87.0％，7S粗組分純度達(dá)到62.5％：純化后的大豆球蛋白純度達(dá)到93.8％，β-伴大豆球蛋

3、白達(dá)到67.2％，單位豆粕含大豆球蛋白182.34g/kg，β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。 實(shí)驗(yàn)二：利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，研究了不同水平純化大豆球蛋白、β-伴球蛋白(0、0.5 mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml)對豬外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMC)增殖和免疫功能的影響。 結(jié)果表明：大豆球蛋白、β-伴球蛋白顯著增加體外培養(yǎng)的豬外周單核淋巴細(xì)胞數(shù)量，極顯著影響細(xì)胞MTT

4、0D值(P<0.01)。β-伴球蛋白與培養(yǎng)液IL-2、IL-6、IFN-γ、IgA含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，大豆球蛋白對培養(yǎng)液中IL-2、IL-6、IFN-γ、IgG、IgM、IgA含量影響不顯著(P>0.05)。 本實(shí)驗(yàn)研究表明，豆粕可分離出純度達(dá)到93.8％的大豆球蛋白丑82.34g/kg和純度達(dá)到67.2％的β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。大豆球蛋白、β-伴球蛋白促進(jìn)體外培養(yǎng)斷奶仔豬外周淋巴血細(xì)胞轉(zhuǎn)化和過度