TAp63及Bcl-2在急性白血病中的表達及意義.pdf

1、背景和目的:急性白血病是一類造血干、祖細胞來源的惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病，其顯著特征是細胞過度增殖和凋亡受抑，多種癌基因、抑癌基因及其相關基因功能異常，引起其相應蛋白的變化，導致細胞周期紊亂，細胞惡性增殖，凋亡受阻，促進了白血病的發(fā)生發(fā)展。多種基因調(diào)節(jié)著細胞凋亡，細胞凋亡調(diào)控異常是多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的關鍵因素之一。p63基因是p53家族成員之一，與p53基因高度同源，但結構和功能不同。p63在腫瘤中的作用目前還不十分清楚，F(xiàn)ridaLant

2、ner等的研究發(fā)現(xiàn)：在正常細胞中，TAp63能夠上調(diào)Bcl—2 mRNA及Bcl—2蛋白質(zhì)的表達，對于維持成熟B淋巴細胞的生存與增殖能力有重要作用。Bcl—2基因是Tsujimto等從伴有t(14；18)的濾泡性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，白血病的發(fā)生與Bcl—2和bcl—x1等其它凋亡途徑調(diào)節(jié)基因的過度表達與耐藥相關。目前國內(nèi)外對p63基因的研究局限于實體瘤，p63基因在急性白血病中的表達及意義國內(nèi)外至今未見報道，關于TAp63mRNA

3、及Bcl—2 mRNA在急性白血病表達的意義，值得進一步研究。故本文應用半定量RT—PCR方法檢測初治、復發(fā)及緩解后急性白血病患者與非惡性血液病患者的骨髓單個核細胞中TAp63mRNA及Bcl—2 mRNA表達水平及它們的相關性，探討其在急性白血病發(fā)生發(fā)展中的意義。
　　 材料與方法:
　　 1．研究對象:收集81例初治及復發(fā)急性白血病(AL)，包括50例急性淋巴細胞白血病(ALL)和31例初治及復發(fā)急性髓系白血病(AM

4、L)患者，同時收集27例非惡性血液病患者為對照。所有急性白血病患者均為鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2010年3月至2010年9月住院的初治或復發(fā)病例。所有急性白血病患者經(jīng)過血常規(guī)、骨髓細胞形態(tài)學、細胞化學、免疫表型及細胞遺傳學檢查，符合急性白血病的診斷標準。81例AL患者中男48例，女33例，中位年齡42歲(14～70歲)；50例ALL包括32例急性B淋巴細胞白血病(B—ALL)，18例急性T淋巴細胞白血病(T—ALL)。31例AML包

5、括6例AML—M3，14例AML—M2，4例AML—M4，7例AML—M5。對照組為同期血液內(nèi)科非惡性血液病患者27例，其中男10例，女17例，中位年齡38歲(21歲～57歲)。
　　 2．半定量RT—PCR法分離單個核細胞，TRIZOL法提取細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，PCR擴增25個循環(huán)。電泳后，紫外燈下照相，所有陽性結果進行灰度分析并計算TAp63/β—actin和Bcl—2/β—actin的比值。
　　 3.

6、統(tǒng)計學處理:采用SPSS10．0統(tǒng)計軟件進行處理，定量資料用平均值士標準差(x±s)表示，兩組獨立樣本的均數(shù)比較用t檢驗，多組定量資料組間比較采用單因素方差分析，TAp63與Bcl—2表達量的相關性應用Pearson直線相關分析，以α=0．05作為檢驗水準。P<0．05認為具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1.TAp63 mRNA在急性白血病組與對照組的表達50例ALL患者TAp63 mRNA表達的有49例，31例A

7、ML患者均表達TAp63mRNA，27例對照組不表達TAp63 mRNA。TAp63 mRNA在急性白血病組表達顯著高于非惡性血液病組。
　　 2.TAp63 mRNA在ALL與AML表達的比較對50例ALL和31例AML患者的相對表達量進行比較，結果顯示ALL平均表達量(0．92±0．42)顯著高于AML(0．73±0．22)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 3.TAp63 mRNA在不同組別ALL的表達50例ALL包括B—

8、ALL32例和T—ALL18例。32例B—ALL有31例表達TAp63mRNA，18例T—ALL均表達TAp63 mRNA，B—ALL的平均表達量(1．11±0．40)顯著高于T—ALL(0．60±0．18)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4.TAp63 mRNA在B—ALL、T—ALL、AML表達的統(tǒng)計分析對B—ALL、T—ALL和AML這三組獨立樣本的TAp63 mRNA平均表達量進行比較，應用單因素方差分析(F檢驗)，顯示三組

9、之間表達量有顯著統(tǒng)計學差別，三組樣本的總體均數(shù)不全相等，再對三組樣本均數(shù)進行兩兩比較，應用LSD法和Bonferroni法檢驗，兩種方法檢驗結果均顯示：B—ALL與T—ALL之間有統(tǒng)計學差別，B—ALL與AML之間有統(tǒng)計學差別，但T—ALL和AML表達量無統(tǒng)計學差別。
　　 5.ALL不同階段TAp63 mRNA表達的動態(tài)變化動態(tài)觀察5例初治ALL患者化療后不同階段TAp63 mRNA的表達變化，其化療前均高表達TAp63 mR

10、NA，完全緩解后低表達或不表達TAp63 mRNA，復發(fā)后再次高表達TAp63 mRNA。復發(fā)時TAp63 mRNA的表達量略高于初治時，但差異無顯著性意義。初治及復發(fā)時TAp63表達量顯著高于完全緩解時，初治及復發(fā)時與對照組相比較，表達量有顯著差異。完全緩解組與對照組相比差異無顯著性意義。
　　 6.Bcl—2 mRNA在ALL、AML與對照組的表達50例ALL患者中30例表達Bcl—2 mRNA(陽性率60％)，31例AML

11、患者中20例表達Bcl—2 mRNA(陽性率64．5％)，對照組均不表達(陽性率0)，急性白血病組與對照組相比較有顯著差異。ALL與AML兩者相比較差異無顯著性意義。
　　 7.TAp63 mRNA及Bcl—2 mRNA表達的相關性50例ALL患者TAp63 mRNA及Bcl—2 mRNA在AL中的表達水平有顯著相關性。
　　 結論:
　　 1．TAp63及Bcl—2在急性白血病中的表達明顯高于非惡性血液病患者。