BAG-1在急性白血病中的表達及其與BCL-2、BAX的相關性研究.pdf

1、急性白血病是造血細胞惡性克隆性疾病,其顯著特征是細胞過度增殖和凋亡受抑,多種癌基因、抑癌基因及其相關基因功能異常,引起其相應蛋白的變化,導致細胞周期紊亂,細胞惡性增殖,凋亡受阻,促進了白血病的發(fā)生發(fā)展.凋亡在癌形成中起著重要作用,并受幾種基因的調節(jié).位于9號染色體上的抗凋亡基因BAG-1(即Bc1-2結合抗凋亡基因)是1995年從鼠細胞中克隆出來.已經發(fā)現抗凋亡蛋白BAG-1在人類多種癌細胞中高表達,尤其是白血病、乳腺癌、前列腺癌和結腸

2、癌.BAG-1蛋白有四種亞型,即p50(BAG-1L)、p46(BAG-1M)、p33(BAG-1S)和p29,它們是由BAG-1mRNA的不同起始密碼開始翻譯得到的.BAG-1蛋白在結構上有BAG結構域、泛素樣結構域、核定位序列和.TXSEEX重復序列.四種BAG-1亞型在共同的C末段的BAG-1結構域可以與Bc1-2、Hsp70和Raf-1相互作用;共有的泛素樣結構域可以與蛋白酶體結合并靶向分子伴侶蛋白HSp70/Hsc70從而調節(jié)

3、蛋白質的降解;N末段似乎在BAG-1與核激素受體的結合方面起著重要作用.因此,BAG-1蛋白可能通過與其它蛋白(如Bc1-2蛋白、熱休克蛋白、蛋白激酶、核激素受體等)相互作用來抑制凋亡;通過Hsp70/Hsc70途徑、信號轉導途徑、轉錄途徑、凋亡途徑和蛋白質降解途徑等在腫瘤的形成和進展中起重要作用.Bc1-2基因位于18號染色體上,首先是在帶有t(14;18)染色體的濾泡性淋巴瘤中發(fā)現的.Bc1-2基因家族在凋亡中起著重要作用,抗凋亡基

4、因Bc1-2和促凋亡基因Bax同屬Bc1-2基因家族.BAG-1是一個抗凋亡蛋白,它不僅有獨立的抗凋亡作用,而且可以增強Bc1-2的抗凋亡活性.本實驗采用免疫細胞化學法檢測BAG-1、Bc1-2以及BaX蛋白在初治急性白血病患者及完全緩解1.研究對象:(1)初治急性白血病組:共收集標本54例,其中男性32例,女性22例,年齡10-75歲(中位年齡35歲).將全部初治急性白血病患者分為兩組:①急性髓系白血病AMU)33例,其中Mo<,0>

5、2例,M<,1>2例,M<,2>16例,M<,3>5例,M<,4>3例,M<,5>3例,M<,6>1例,M<,7>1例;②急性淋巴細胞白血病(ALL)21例.所有急性白血病患者均依據FAB分型診斷標準劃分.(2)完全緩解病人30例,為初治組完全緩解后標本.(3)對照組為非惡性血液病骨髓正常者.所有觀察對象均取自于2006年5月至12月鄭州大學第一附屬醫(yī)院就診患者. 2.標本處理:化療前采集患者骨髓和對照者骨髓1ml,分離單個核細胞,制備

6、細胞滴片,采用免疫細胞化學法染色檢測BAG-1、Bcl-2和Bax蛋白在初治AL(Aate leukemia)、AL-CR及正常對照者骨髓細胞中的表達. 3.數據統(tǒng)計:實驗數據用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學處理,BAG-1抗原、Bcl-2抗原和Bax抗原陽性率比較采用X<'2>檢驗,變量間的相關分析應用Spearman等級相關分析,以α=0/05為檢驗水準. 結果 1.BAG-1在正常人骨髓標本中不表達或呈微弱

7、表達.在初治AL患者骨髓單個核細胞中66.7﹪呈現細胞核或細胞漿的陽性和(或)強陽性表達,其中AML,陽性率為63.6﹪ ,ALL陽性率為71.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在.AL-CR.中陽性率為13.3﹪,其中AML-CR陽性率為5.3﹪,ALL-CR陽性率為27.3﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).初治組與正常對照組(陽性率為5.3﹪),初治組與AL-CR.組之間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)

8、,AL-CR組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且初治AML與AML-CR之間、初治ALL與ALL-CR之間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05). 2.Bcl-2在正常人骨髓標本中不表達或微弱表達.在初治AL患者骨髓單個核細胞中55.6﹪呈現細胞漿或細胞膜的陽性和(或)強陽性表達,其中.AML的陽性率為54.5﹪,ALL的陽性率為57.1﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在AL-CR中陽性率為10.0﹪,其

9、中.AML-CR陽性率為5.3﹪,ALL-CR陽性率為27.3﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).初治組與正常對照組(陽性率為10.5﹪),初治組與AL-CR組之間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),AL-CR組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且初治AM[,與AML-CR之間、初治ALL與ALL-CR之間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05).3.Bax在正常人骨髓標本中呈微弱表達.在初治AL患者骨髓單個核細胞中2

10、9.6﹪呈陽性和(或)強陽性表達,其中AML的陽性率為36.4﹪,.ALL,的陽性率為19.0﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在.AL-CR中陽性率為40.0﹪,其中.AML-CR陽性率為42.1﹪,ALL-CR陽性率為36.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).初治組與正常對照組(陽性率為15.8﹪),初治組與ALCR組,AL-CR組與正常對照組,初治AML,與AML-CR,初治ALL與ALL-CR之間差異均無

11、統(tǒng)計學意義(P>0.05)4.根據陽性細胞積分分別將BAG-1、Bd-2和Bax分為高表達組(積分蘭4分)和低表達組(<4分),分析與臨床特征的關系:BAG-1、Bd-2及Bax表達水平與患者年齡、性別、診斷時外周血白細胞數以及髓外浸潤無明顯相關關系(P>0.05),但BAG-1高表達組完全緩解(CR)率低于低表達組CR率,差異有顯著性(P<0.05);Bel-2高表達組CR.率低于低表達組CR率,差異有顯著性(P<0.05);Bax高

12、表達組CR率高于低表達組CR率,差異有顯著性(P<0.05).5.相關性分析顯示BAG-1與Bel-2、Bax分別呈正相關(r=0.515,P<0.05)和負相關(r=0.313,P<0.05)關系.@2結論1.BAG-1和Bel-2在初治AML和ALL患者中的表達均顯著高于正常對照組以及完全緩解組,且BAG-1高表達組CR率低于低表達組,Bel-2高表達組CR率低于低表達組,說明BAG-1和Bel-2表達增高可能不同程度地影響了急性白