ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細(xì)胞侵襲作用的研究.pdf

1、中國(guó)圖書分類法單位代碼：10660分類號(hào)：R737.33學(xué)號(hào)：S080049貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院2011屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細(xì)胞侵襲作用的研究研究生：鄒家瓊導(dǎo)師：羅昭遜年級(jí)：2008級(jí)專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)2011年5月5日2011屆碩士研究生畢業(yè)論文ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細(xì)胞侵襲作用的研究1ΔNp63基因?qū)m頸癌HeLa細(xì)胞侵襲作用的研究專業(yè)名稱：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)研究生：鄒家瓊導(dǎo)師：羅昭遜摘要

2、目的：研究ΔNp63基因在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)；研究抑制ΔNp63基因表達(dá)后宮頸癌HeLa細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的改變；探討ΔNp63基因在HeLa細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移作用中與Z01的關(guān)系。方法：1）擴(kuò)增并提取ΔNp63shRNA質(zhì)粒做序列鑒定，通過脂質(zhì)體法介導(dǎo)ΔNp63shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細(xì)胞，采用G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)ΔNp63shRNA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞，采用Westernblot檢測(cè)干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后HeLa細(xì)胞中ΔNp63蛋白

3、的表達(dá)；2）采用同質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)、異質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HeLa細(xì)胞侵襲、遷移能力的改變。3）利用激光共聚焦掃描顯微鏡及Westernblot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)HeLa細(xì)胞中ΔNp63干擾前后ΔNp63蛋白與ZO1蛋白表達(dá)的改變；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)在ΔNp63基因干擾前后HeLa細(xì)胞中ΔNp63mRNA與ZO1mRNA量的變化；探討ΔNp63與ZO1在細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移中的相互作用及關(guān)系。結(jié)果：1）成功擴(kuò)

4、增、純化ΔNp63shRNA質(zhì)粒，通過序列檢測(cè)鑒定證明ΔNp63shRNA質(zhì)粒序列與設(shè)計(jì)序列相吻合，確定ΔNp63shRNA表達(dá)質(zhì)粒在48h時(shí)的轉(zhuǎn)染效率為最佳，通過G418（700μgml）篩選3周得到穩(wěn)定表達(dá)ΔNp63shRNA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞，Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示干擾質(zhì)粒組的ΔNp63蛋白表達(dá)與陰性質(zhì)粒組及空白組比較明顯降低（p0.05），而在24h時(shí)干擾質(zhì)粒組與空白組和陰性質(zhì)粒組比較細(xì)胞遷移數(shù)出現(xiàn)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)