二甲雙胍促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制.pdf

1、背景和目的：
　　在2型糖尿病患者中，治療糖尿病藥物二甲雙胍降低了多種腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)及改善其預(yù)后，并有良好的安全用藥記錄，因此對(duì)二甲雙胍的化學(xué)療效和抗腫瘤作用已直接在部分腫瘤中進(jìn)行II期和III期的臨床試驗(yàn)。隨著流行病學(xué)調(diào)查和臨床前研究的增多，提示了二甲雙胍抗腫瘤存在多種不同的潛在機(jī)制，在不同組織和腫瘤類型中起著重要作用。
　　食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是

2、消化道常見(jiàn)惡性腫瘤，是全球六大致死性癌癥之一，臨床治療效果不佳。ESCC是一種炎癥信號(hào)通路異常的炎癥性惡性腫瘤，Stat3是多種致癌和炎癥信號(hào)通路包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和癌基因等的聚集點(diǎn)。此外，Stat3及其下游靶基因Bcl-2通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡影響了腫瘤細(xì)胞的存活。Stat3已經(jīng)作為癌癥治療的一種有前途的分子靶向目標(biāo)。
　　許多對(duì)二甲雙胍抗腫瘤作用的研究集中于誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)。也有報(bào)道證明二甲雙胍可以引起自噬作用。二甲雙胍通過(guò)識(shí)別腫瘤

3、治療的新靶點(diǎn)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。
　　因此，我們研究了二甲雙胍對(duì)ESCC細(xì)胞在體內(nèi)和體外的效應(yīng)，特別是證實(shí)了二甲雙胍失活Stat3/Bcl-2信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡對(duì)食管鱗癌的治療作用，并通過(guò)干預(yù)自噬效應(yīng)增強(qiáng)二甲雙胍的抗腫瘤作用。
　　方法：
　　食管鱗癌細(xì)胞用不同濃度二甲雙胍處理，利用Annexin V-FITC和PI雙染實(shí)驗(yàn)、JC-1染色、TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，并驗(yàn)證凋亡相關(guān)蛋白變化情況。并通過(guò)干擾S

4、tat3或過(guò)表達(dá)Bcl-2驗(yàn)證二甲雙胍作用通路。
　　用二甲雙胍處理食管鱗癌細(xì)胞，并使用藥物自噬抑制劑，或者使用siRNA干擾自噬相關(guān)基因，抑制細(xì)胞自噬的發(fā)生，檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡情況，并驗(yàn)證凋亡相關(guān)蛋白的變化情況。
　　裸鼠腹股溝皮下注射食管鱗癌細(xì)胞觀察成瘤，一周后連續(xù)腹腔注射單純二甲雙胍或二甲雙胍聯(lián)合自噬抑制劑4周，連續(xù)監(jiān)測(cè)小鼠體重及腫瘤體積，實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)剝離腫瘤進(jìn)行凋亡檢測(cè)，并繪制生長(zhǎng)曲線圖。
　　結(jié)果：
　　

5、1.二甲雙胍誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡性細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡是二甲雙胍誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞死亡的主要方式。
　　2.二甲雙胍作用于食管鱗癌細(xì)胞可以有效降低p-Stat3及其下游靶基因Bcl-2表達(dá)并誘導(dǎo)凋亡。人為干擾Stat3表達(dá)時(shí)，細(xì)胞凋亡也隨之增加，而過(guò)表達(dá)Bcl-2時(shí)二甲雙胍對(duì)食管鱗癌的促凋亡作用被減弱。
　　3.二甲雙胍可以誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬，二者相互影響。藥物抑制細(xì)胞自噬可以增強(qiáng)二甲雙胍對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的促凋亡作

6、用。
　　4.使用 siRNA在基因水平干擾自噬的發(fā)生，也可以增強(qiáng)二甲雙胍對(duì)食管癌細(xì)胞的促凋亡作用。
　　5.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，與單獨(dú)使用二甲雙胍對(duì)比，二甲雙胍與自噬抑制劑CQ聯(lián)合運(yùn)用，對(duì)裸鼠皮下ESCC細(xì)胞成瘤的抑制效應(yīng)更加明顯。
　　結(jié)論：
　　1.二甲雙胍能以時(shí)間和劑量依賴的方式誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡性細(xì)胞死亡。
　　2.二甲雙胍通過(guò)失活Stat3/Bcl-2信號(hào)通路誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞凋亡，對(duì)此通路的研究是