二甲雙胍激活A(yù)MPK、調(diào)控MMP-2,9和N-cadherin抑制食管鱗癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、背景及目的：
　　二甲雙胍是一種雙胍類口服降糖藥,是主要針對(duì)2型糖尿病治療的一線藥物。最近有研究表明，二甲雙胍可以影響腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，發(fā)揮抗腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。既往研究認(rèn)識(shí)其抗腫瘤作用的一個(gè)重要機(jī)制是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）,誘導(dǎo)增殖抑制、細(xì)胞周期停滯、促進(jìn)細(xì)胞凋亡；我們前期的研究也論證了二甲雙胍可以在體內(nèi)外誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞株增殖抑制、細(xì)胞周期停滯和促進(jìn)細(xì)胞凋亡

2、。然而有關(guān)二甲雙胍對(duì)食管癌細(xì)胞是否具有抑制侵襲轉(zhuǎn)移的作用及相關(guān)機(jī)制研究至今仍鮮有報(bào)道。本研究將探討二甲雙胍對(duì)食管鱗癌EC109細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機(jī)制，為臨床上二甲雙胍成為治療食管癌的新型抗腫瘤藥物提供新的理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法：
　　1.用含10％胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管鱗癌細(xì)胞株EC109。
　　2.細(xì)胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加

3、藥，用含不同濃度(0、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細(xì)胞24h，以PBS處理細(xì)胞為對(duì)照，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測(cè)二甲雙胍對(duì)EC109細(xì)胞遷移、侵襲的影響。
　　3.細(xì)胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含不同濃度(0、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細(xì)胞24h，PBS處理組作為對(duì)照組，用Western

4、Blot檢測(cè)AMPK磷酸化程度。
　　4.細(xì)胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含10μM的Compound C培養(yǎng)基預(yù)處理8h,而后加或不加二甲雙胍（特定濃度20mM）作用至24h，PBS處理組作為對(duì)照組，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測(cè)各組細(xì)胞遷移、侵襲的能力。
　　5.細(xì)胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含不同濃度(0

5、、5、10、20mM)二甲雙胍濃度培養(yǎng)基處理EC109細(xì)胞24h，PBS處理組作為對(duì)照組，用Western Blot檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2，9以及間質(zhì)細(xì)胞表型蛋白N-cadherin的表達(dá)。
　　6.細(xì)胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度至80%左右開始加藥，用含10μM的Compound C培養(yǎng)基預(yù)處理8h,而后加或不加二甲雙胍濃度20mM作用至24h，PBS處理組作為對(duì)照組，用Western Blot檢測(cè)AMPK磷酸化程度

6、、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2，MMP-9以及間質(zhì)細(xì)胞表型蛋白N-cadherin的表達(dá)量。
　　7.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和處理：用GraphPad Prism5.0軟件，所有數(shù)據(jù)均使用單因素方差分析的Newman-Keul's檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.二甲雙胍抑制EC109細(xì)胞的遷移、侵襲能力。
　　2.二甲雙胍激活EC109細(xì)胞的AMPK磷酸化。
　　3.Compound C（AMPK抑制劑）減弱二