體外兔髓核細(xì)胞培養(yǎng)及hIGF-1對(duì)兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景：椎間盤(pán)退變是引起下腰痛的重要原因之一，在退變的椎間盤(pán)中，髓核細(xì)胞大量凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）有明顯抑制軟骨細(xì)胞凋亡的作用，表明IGF-1可能會(huì)有抑制類軟骨細(xì)胞—髓核細(xì)胞凋亡的作用。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立家兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，利用白介素-1（IL-1）誘導(dǎo)培養(yǎng)的家兔椎間盤(pán)髓核細(xì)胞凋亡，用 IGF-1對(duì)凋亡模型進(jìn)行干預(yù)，探討胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）對(duì)髓核細(xì)胞凋亡的抑制作用，揭示

2、其抗凋亡作用機(jī)制，為IGF-1防治椎間盤(pán)退變提供理論依據(jù)。
　　方法：1.從健康家兔取出椎間盤(pán)髓核，用Ⅱ型膠原酶消化法分離原代椎間盤(pán)髓核細(xì)胞后，單層培養(yǎng)并以胰酶消化法傳代，采用差速貼壁法進(jìn)行純化。2.采用Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色、甲苯胺藍(lán)染色對(duì)髓核細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3.按空白組、IGF-1組（IGF-1、IL-1兩種細(xì)胞因子共同作用）和IL-1組（僅IL-1因子作用）進(jìn)行分組處理。4.利用光學(xué)顯微鏡、Giemsa染色、原位末端標(biāo)記（T

3、UNEL）技術(shù)進(jìn)行觀察，以 Annexin-v/PI雙染細(xì)胞后，用流式細(xì)胞儀測(cè)定的各組髓核細(xì)胞早期和晚期凋亡率作為凋亡檢測(cè)指標(biāo)。
　　結(jié)果：1.IL-1組光鏡下可見(jiàn)大量髓核細(xì)胞凋亡，并可見(jiàn)典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變， IGF-1組可見(jiàn)少量細(xì)胞凋亡，空白組罕見(jiàn)凋亡征象。2.Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色呈強(qiáng)陽(yáng)性，甲苯胺藍(lán)染色呈異染性。3.原位末端標(biāo)記顯示：空白組凋亡率為（0.45±0.06），IL-1組凋亡率為（17.80±5.11），IG

4、F-1組凋亡率為（6.11±1.39）。與IL-1組比較, IGF-1組細(xì)胞凋亡率明顯降低，差異有顯著性（P<0.01）；與空白組比較， IL-1組細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有顯著性（P<0.01）。4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：空白組早期凋亡率為（0.49±0.05），晚期凋亡率為（0.21±0.06）；IL-1組早期凋亡率為（22.16±2.69），晚期凋亡率為（12.98±2.02）；IGF-1組早期凋亡率為（5.03±0.96），晚期凋

5、亡率為（7.98±1.37）。與IL-1組比較, IGF-1組細(xì)胞早期和晚期凋亡率都明顯降低，差異均有顯著性（P<0.01）。與空白組比較，IL-1組早期和晚期凋亡率都明顯增高，差異均有顯著性（P<0.01）。
　　結(jié)論：1.本研究建立了簡(jiǎn)單易行的髓核細(xì)胞分離、培養(yǎng)方法；原代、第二代細(xì)胞生長(zhǎng)良好，表型穩(wěn)定，適合于實(shí)驗(yàn)研究，髓核細(xì)胞四代培養(yǎng)后，細(xì)胞表型發(fā)生改變。2. IL-1可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的髓核細(xì)胞凋亡。3. IGF-1對(duì)IL-1