FasL維持椎間盤免疫豁免及誘導髓核細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：①觀察采用18G皮膚穿刺針穿刺纖維環(huán)，誘導兔椎間盤退變建立動物模型。②了解生理學屏障與FasL的分子生物學效應(yīng)之間的聯(lián)系，探討椎間盤退變的發(fā)病機制。③了解FasL目的基因在正常人椎間盤及椎間盤突出癥患者椎間盤組織中的表達情況。 方法：⑴新西蘭大白兔24只，用持針器夾持18G皮膚穿刺針從左前外側(cè)刺入L3/4、L4/5、L5/6椎間盤的纖維環(huán)，深度控制在5mm。術(shù)前及術(shù)后3、6、10周對造模后的椎間盤及正常的椎間盤（L2/3）

2、行MRI掃描，并在術(shù)后3、6、10周對其行免疫組化及組織學觀察。⑵采用18規(guī)格的皮膚穿刺針穿刺家兔纖維環(huán)，在術(shù)后的3、6、10周收集正常及穿刺后的椎間盤組織，免疫組織化學染色觀察Fas與FasL的表達，流式細胞技術(shù)分析髓核細胞凋亡指數(shù)。⑶收集16例腰椎間盤突出癥患者的椎間盤組織（破裂型與非破裂型各8例）及4例正常人椎間盤組織，通過RT—PCR技術(shù)觀察FasL，F(xiàn)as，TNF and IL目的基因的表達情況，并比較其表達程度。 結(jié)

3、果：①MRI結(jié)果提示，從術(shù)后第3周到第10周，造模后的椎間盤T2WI信號呈現(xiàn)持續(xù)減弱趨勢，免疫組化及組織學觀察發(fā)現(xiàn)髓核細胞的數(shù)量及Ⅱ型膠原含量進行性減少（p<0．01）。②正常髓核組織中可見少許髓核細胞胞漿中FasL呈弱陽性染色，實驗組髓核細胞胞漿則呈強陽性染色。FasL陽性細胞百分比在正常組與各實驗組之間的差異具有非常顯著性差異（P<0．001，兩兩比較）。三個實驗組的髓核細胞平均凋亡指數(shù)明顯高于正常組（P<0．001，0．002 a

4、nd0．006，兩兩比較）。實驗組髓核細胞FasL陽性表達百分比與Fas陽性表達百分比之間具有顯著相關(guān)性（r=0．571，P=0．0036）。③正常髓核組織中僅有FasL的表達，突出的椎間盤組織中存在FasL，F(xiàn)as，TNF and IL的表達，而且表達指數(shù)在破裂型組與非破裂型組之間具有顯著性差異（P<0．05）。 結(jié)論：⑴纖維環(huán)穿刺法可以誘導兔椎間盤的緩慢退變，這一模型為研究椎間盤退變提供了有效的載體。⑵FasL與生理學屏障的