雜色鮑sod、cat和mpeg基因的克隆與分析.pdf

1、本研究利用RT-PCR技術(shù)和RACE方法克隆了雜色鮑抗氧化防御系統(tǒng)相關(guān)基因sod、cat和抗病相關(guān)基因mpeg及內(nèi)參標(biāo)基因28S rRNA。進(jìn)而用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析了sod、cat和mpeg基因在病原菌感染和污染物暴露下的表達(dá)譜。結(jié)果表明： (1)sod基因組DNA全長(zhǎng)含有5個(gè)外顯子，4個(gè)內(nèi)含子，第一個(gè)和第四個(gè)內(nèi)含子遵循GT-AG規(guī)則。Sod基因cDNA序列全長(zhǎng)984 bp，5’UTR為5bp，ORF為465 bp，3’UTR

2、為514bp，可編碼154個(gè)氨基酸。同源性分析表明該序列與其它貝類sod基因具有很高的相似性。進(jìn)化分析顯示，雜色鮑sod基因與其它軟體動(dòng)物sod基因占據(jù)進(jìn)化上獨(dú)立的分支，而魚類、哺乳動(dòng)物各集成一支。定量PCR分析發(fā)現(xiàn)，在副溶血弧菌感染后的第8h、24h、48h和96h時(shí)相，sod基因表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異；在TBT暴露下的第2h、12h、48h和192h時(shí)相中，只有在12h時(shí)相，雜色鮑肝胰腺的sod基因表達(dá)水平顯著低于與對(duì)照組，其余時(shí)相未

3、見變化。 (2)獲得了2312 bp cat基因的cDNA 部分片段。雜色鮑感染副溶血弧菌后,肝胰腺中cat基因表達(dá)水平在第24h顯著低于對(duì)照組，在TBT暴露下，肝胰腺中的cat基因表達(dá)水平在第2h顯著低于對(duì)照組。 (3)免疫相關(guān)基因mpeg，cDNA全長(zhǎng)2781bp，5’UTR為252bp，ORF為2187bp，3’UTR為342bp，編碼728個(gè)氨基酸。同源性分析表明，其與粉鮑、紅鮑的mpeg基因具有很高的相似性。進(jìn)化分